脂质体介导的真核细胞转染实验
脂质体介导短暂表达
脂质体进行稳定转染
哺乳动物细胞的选择标记
实验材料 | 哺乳动物细胞 |
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试剂、试剂盒 | 质粒DNA 完全培养基 氯化铯 DMEM |
仪器、耗材 | 培养皿 培养箱 聚苯乙烯管 |
实验步骤 |
1. 按5×105细胞/孔的量在六孔板中接种指数期生长的细胞,在37℃ 5%CO2培养箱中 培养过夜,直至细胞80%汇片。(如果用100 mm 培养皿代替六孔扳,则培养细胞至80%汇片,将所有数量扩大8倍)
2. 在聚苯乙烯管中配制DNA/脂质体复合物如下:稀释质粒DNA至1 ml DMEM-SF中,在旋涡混合器上振荡1 s 然后加入脂质体悬液、再次旋起混匀。在室温下温育5~ 10 min,使DNA与阳离子脂质体结合。
3. 吸去DMEM-SF培养液,用1 ml 的完全DMEM-SF洗1次,吸去DMEM-SF。对毎个35 mm 孔中,直接在细胞上加1 ml DNA/脂质体复合物。在37℃培养箱中温育3~5 h。
4. 往每孔细抱中加入1 ml 的DMEM-20完全培养液,在37℃培养箱中继续温育24~48 h。
6. 收集细胞:用细胞刮于刮下细胞,或胰蛋白酶消化或冻融裂解细胞。 进行适当的表达分析。
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