原代细胞应用困局
经过一次传代后，原代细胞培养物就会成为二级细胞培养物，也称为细胞株。然而，尽管称为细胞株，但其寿命是有限的（除非如前所述永生化）。这种有限的分裂能力体内的细胞相似，一旦细胞在体内完全分化以发挥其特殊功能，细胞将停止增殖-这是固有的癌症保护性衰老过程。此外，某些原代细胞有丝分裂后，无论是在体内或体外培养中都不增殖（例如，神经元，骨骼肌细胞，心肌细胞，周细胞，终末分化的肝细胞）。因此，每次进行实验后，原代细胞培养都需要再次从新鲜的组织中解离。
由于样品处理过程和培养条件都需要优化，建立原代细胞培养可能是一个棘手的过程。在分离和解离过程中使用抗生素可以帮助防止污染。然而，时间、技术和试剂是促成您成功的最重要因素。必须注意整个潜在的污染源、传代的最佳细胞密度（60%–80%），以及可能的细胞结块或细胞粘附不当。
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