关注公众号

关注公众号

手机扫码查看

手机查看

喜欢作者

打赏方式

微信支付微信支付
支付宝支付支付宝支付
×

食用菌一级菌种培养基灭菌效果的检验

2019.9.12

灭菌后的空白培养基的无菌检验,应视为菌种生产常规,尤其是母种培养基的空白培养,更是不可缺少的工作程序。经过检验确认培养基已达到灭菌的目的,才能用于菌种分离或母种的扩大培养。

1.斜面无菌检验 在已灭菌的斜面中,随机抽取几支,置于25~32℃恒温箱内培养3d,如培养基表面及基质内无任何杂菌菌落出现,说明已达到灭菌目的,否则说明灭菌不彻底。也可将灭菌后斜面全部置于28℃恒温室内培养3d,剔除被污染的斜面进行接种。必须指出的是,有一种水渍样细菌菌落,常零散的、不规则地出现在培养基表面,因类似试管中冷凝水的水渍而被忽略,斜面接种后,并不影响食用菌菌丝生长,其培养物接种在木屑、粪草等固体培养基上,也无异常表现,若接种在麦粒培养基上,则会出现明显“湿斑”,使菌种生产失败。

2.固体培养基无菌检验在实际生产中,很少用固体培养基作空白培养检验,但在下述情况时,如采用新的培养基配方,使用新的灭菌设备,或对灭菌工艺(如灭菌温度、压力或时间)进行了改进,则空白培养检验应视为必不可缺少的步骤。其方法是在灭菌器内不同部位随机抽取若干瓶(袋),置于25~32℃温室内培养5d,如培养基表面或瓶(袋)壁均无杂菌菌落出现,则说明已达到灭菌目的,否则需重新灭菌后使用。

为更准确的检验固体培养基的质量,可取少量硫黄粉(最好是化学纯的升华硫)分装到若干支安瓿瓶内,封口,做好标记,分别置放于灭菌器的不同部位,与待灭菌物一同灭菌。灭菌结束后,取出安瓿瓶,如瓶内硫黄已熔化结块,则证明该处灭菌温度已达119℃,达到了灭菌要求(因硫黄的熔融温度是119℃)。也可根据需要选用其他灭菌温度指示剂,如盐酸小檗碱、乙酰苯胺、苯甲酸等,其熔融温度皆不同。此法可对自制高压灭菌锅的工作效能进行检验,是一种实用而简便的检验方法。

3.液体培养基无菌检验

(1)平板划线法在无菌条件下,用接种环蘸取已灭菌的培养液,用划线法接于培养皿或三角瓶的平板培养基上,在25~32℃下培养2~3d,若无杂菌菌落出现,说明已达灭菌目的。

(2)细菌检验将已灭菌培养液在无菌条件下,接入酚红肉汤培养基中,置于37℃培养24h,进行镜检,应无细菌活体。若有杆状细菌,说明培养液灭菌不彻底;如为球状细菌,则为操作或通气带来的污染。

(3)镜检观察直接取已灭菌培养液,染色后镜检,视野内有细菌和酵母菌为灭菌不彻底。


推荐
关闭