粮食中赭曲霉毒素A的测定高效液相色谱法和荧光光度法
粮食中赭曲霉毒素A的测定高效液相色谱法和荧光光度法(Classic PAX(混合型阴离子交换柱), P/N: SAC-PAX06150 )
1.实验材料
固相萃取柱:Classic PAX(混合型阴离子交换柱 (150mg/6mL)
2.样品制备
2.1 玉米:称取试样10g(精确至0.01g),加入三氯甲烷 50mL和5mL 0.1mol/L的磷酸溶液,于振荡器上振荡提取 3~5分钟,提取液用滤纸过滤,取下层滤液 10mL放入100mL平底烧瓶中,于水浴中 40℃用旋转蒸发仪旋转蒸发至接近干涸,用20mL石油醚溶解残渣,加入 10mL提取液,再用振荡器振荡提取 3-5分钟,静置分层后取下层溶液,用滤纸过滤,取滤液5mL进行固相萃取。
2.2 稻谷(糙米)、小麦、小麦粉、大豆:称取试样 10g(精确至0.01g),加入提取液50mL,于振荡器振荡提取 3~5分钟,用滤纸过滤,取滤液10mL放入100mL平底烧瓶中,加入20mL石油醚,振荡器振荡提取3~5分钟,静置分层后取下层溶液,用滤纸过滤,取滤液5mL进行固相萃取净化。
3.净化
用5mL甲醇冲洗Classic PAX(混合型阴离子交换柱)固相萃取柱,再用 3mL提取液润洗。然后将 5mL样品提取液加入柱子中,调节流速以 1滴/s ~ 2滴/s的速度通过柱子,再以同样的流速用3mL淋洗液洗柱,然后用1.2mL蒸馏水快速冲洗柱子,用空气或氮气吹尽柱子中的液体。最后用4-5mL洗脱液快速洗脱赭曲霉毒素A并收集洗脱液于玻璃试管中,于45℃下在氮吹仪上用氮气吹干溶剂。用流动相溶解残渣并定容到1.0mL(或者洗脱液收集于一个50mL的平底烧瓶中,于40℃以下水浴中,10分钟内旋转蒸发至干,用1.0mL流动相溶解残留物),经针式过滤器过滤后备用。
4.色谱条件
流动相:96mL乙腈、102mL水和2mL冰醋酸混合,用0.2µm滤膜过滤并脱气。
流速:1.0mL/min
荧光检测器:激发波长333nm,发射波长460nm
进样量:20µL