关注公众号

关注公众号

手机扫码查看

手机查看

喜欢作者

打赏方式

微信支付微信支付
支付宝支付支付宝支付
×

细胞破碎和蛋白质溶解实验_​高压匀浆法

2019.3.28
实验方法原理细胞悬液从高压室的环状隙高速喷射到静止的撞击环上,被迫改变方向经出口管流出。此过程中细胞经历了高速造成的剪切、碰撞及高压到常压的变化,从而破碎释放内含物。增加压力或增加破碎次数都能提高破碎效率,但压力增加到一定程度零部件磨损较大。通常撞击环较易磨损应定期更换。为防止污染,使用前后高压室至出口管需彻底清洁。
实验材料

细菌或酵母

试剂、试剂盒

裂解缓冲液

仪器、耗材

高压匀浆器

实验步骤

1. 用裂解缓冲液混悬清洗过的细胞。通常细胞湿重(g )与缓冲液体积(ml)之比的范围是 1/1 到 1/4;


2. 加样品液进入高压室,并提升压力至预定值(一般 0.55×108~1.38×108 Pa);


3. 维持上述压力,调整出口流速为每分钟 2~3 ml(约每秒 1 滴)。

注意事项

1. 该法常用来裂解细菌和酵母。


2. 适用于中等体积(10~30 ml)的样品,体积太大或太小均不适宜。


3. 为获得样品最佳破碎效果,样品可以第二次甚至第三次通过高压匀浆。


4. 温度敏感物质有必要低温操作。多次实施时,每次样品要冷。

展开


推荐
关闭