蛋白质印迹法阳性条带异常的原因和解决办法

抗体结合不充分

增加抗体浓度，延长孵育时间

酶失活

直接将酶和底物进行混合，如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物

标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低

设置阳性对照，如果阳性对照有结果，但标本没有则可能是标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低。可考虑增加标本上样量解决靶蛋白含量低的原因

试剂不匹配

一抗与组织种属，一抗与二抗或/和底物与酶系统之间不匹配。通过设置内参照可以验证二级检测系统的有效性

一抗失效

选择在有效期内的抗体；并选择现配现用的工作液

HRP抑制剂

所用溶液和容器中避免含有叠氮化钠

膜没有完全均匀湿透

使用100%甲醇浸透膜

靶蛋白分子质量小于10kD

选择小孔径的膜，缩短转移时间

转移时间不够

对于厚的胶以及高分子量蛋白质需要延长转移时间

抗体活性降低

选择在有效期内的抗体，工作液现配现用，避免长时间放置

封闭过度

减少封闭剂的量或缩短时间；换用不同封闭剂类型

曝光时间过短

延长曝光时间