门冬酰胺酶（埃希）的效价测定方法

酶活力照紫外可见分光光度法(通则0401)测定。磷酸盐缓冲液取0.1mol/L磷酸氢二钠溶液适量,用0.1mol/L磷酸二氢钠溶液调节pH值至8.0。

供试品溶液取本品约0.1g,精密称定,加磷酸盐缓冲液溶解并定量稀释制成每1ml中约含5单位的溶液。对照品溶液取经105℃干燥至恒重的硫酸铵适量,精密称定,加水溶解并定量稀释制成约0.0015mo/L的溶液。测定法取试管3支(14cm×1.2cm),各加入用磷酸盐缓冲液配制的0.33%门冬酰胺溶液1.9ml,于37℃水浴中预热3分钟,分别于第1管(t)中加入25%三氯醋酸溶液0.5ml,第2、3管(t)中各精密加入供试品溶液0.1ml,置37℃水浴中,准确反应15分钟,立即于第1管(t0)中精密加入供试品溶液0.1ml,第2、3管(t)中各加入25%三氯醋酸溶液0.5ml,摇匀,分别作为空白反应液(to)和反应液(t)。

精密量取to、t和对照品溶液各0.5ml,置试管中,各加水7.0ml与碘化汞钾溶液(取碘化汞23g、碘化钾16g,加水至100ml,临用前与20%氢氧化钠溶液等体积混合)1.0ml,混匀,另取试管1支,加水7.5ml与碘化汞钾溶液1.0ml作为空白对照管,室温放置15分钟,在450nm的波长处分别测定t吸光度A0、t吸光度A1和对照品溶液吸光度As,以A:的平均值,按下式计算:效价(单位/mg)=A-A)×5×稀释倍数XFAs×称样量(mg)式中5为反应常数;F为对照品溶液浓度的校正值效价单位定义:在上述条件下,一个门冬酰胺酶单位相当于每分钟分解门冬酰胺产生1mol氨所需的酶量。蛋白质含量取本品约20mg,精密称定,照蛋白质含量测定法(通则0731第一法)测定,即得比活由测得的效价和蛋白质含量计算每1mg蛋白中含门冬酰胺酶活力的单位数。