需要了解反相液相色谱的基础知识
反相液相色谱可供选择的固定相种类繁多令人眼花缭乱，即使是某一种固定相（例如C18）的可选择种类也是很多的。
反相色谱中的保留是基于被分析物、流动相、键合相以及键合了配体的硅胶表面的活性和其可接触性之间的平衡。想要搞清楚影响分离效果的保留机理，就要考虑并明确化学键合相、活性硅胶表面的处理、硅胶表面的可接触性等因素，这些都将影响色谱柱的原始选择性及方法开发的优化。
在大多数反相分离中色散作用是起主要作用的，尤其是那些使用未改性的烷基配体（C18、C8、C4），其保留能力是与被分析物的疏水性成正比的。含有芳香基团或不饱和基团的固定相或被分析物进行分析时，电荷转移（或π-π）作用是起主要作用的。偶极-氢键相互作用对于极性化合物的保留是很重要的，含有“氰基”的固定相会增强对极性化合物的保留。被分析物的电离部分与硅胶表面之间存在静电作用力，这是由于硅胶表面有残留的可离子化的硅醇基。
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