紫外吸收法测定核酸浓度与纯度
实验概要
学习测定DNA或RNA的浓度与纯度。
实验原理
核酸分子中的碱基集团含有共轭双键，它们对紫外光有强烈的吸收。核酸的最大吸收波长在260
nm，吸收低峰在230 nm。可以利用核酸的这一特性对其浓度进行测定。在波长260 nm下，A260=1时，双链DNA的含量为50
µg/ml，单链DNA为 33 µg/ml ，RNA为 40 µg/ml，寡聚核苷酸为 20～30
µg/ml。测出核酸溶液在A260的值，即可得出浓度。
根据经验数据，纯得DNA A260/A280=1.8,纯的 RNA A260/A280=2.0.若样品中含有蛋白或其它杂质会使其比值下降。
主要试剂
TE缓冲溶液
主要设备
紫外分光光度计
实验材料
DNA
实验步骤
1、开机，选择波长
开机前应先检查光路中有无障碍物。然后开启电源开关预热20左右。并调节波长在260 nm下。
2、选择A档，调零
面表上有4个可供选择的模式，本实验选择测定A值，因此选择A模式。待测核酸为水或TE溶液，选择水或TE做空白对照进行调零。
3、测定样品
将待测样品做适当稀释，用仪器配套的石英比色杯，以水或TE为对照的条件下测定，读取并记录样品A260的值。
4、计算样品的浓度
双链DNA浓度=50µg/ml×A260×稀释倍数
单链DNA浓度=33µg/ml×A260×稀释倍数
单链RAN浓度=40µg/ml×A260×稀释倍数
核酸总量=样品浓度×样品体积（ml）
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