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如何有效分离提取cfDNA用于检测?

2020.5.25

说起肿瘤、癌症,已经不再像多年前一样让谈癌色变,但仍旧为人们所恐惧。成功治疗肿瘤还是以早发现早治疗为主。那么尽早检测和发现肿瘤便是首当其冲的核心。液体活检(Liquid biopsy)的检测方法,可以捕获到进入血液的其它细胞或DNA,从而替代了疾病的诊断,例如肿瘤。最近比较火热的液体活检有:cfDNA(Circulating cell-free DNA)、CTC和外泌体的检测。

对于CTC和外泌体的信息,我们已发表过2篇文章描述,欲知详情,请浏览:

游离循环DNA(cfDNA)存在于血液,包含双链DNA片段,绝大多数是短链,而且通常浓度很低。在健康人体中,血浆cfDNA被认为来自于正常的造血细胞。cfDNA的循环半衰期很短,这提示它需要在细胞凋亡时被持续的释放。在特定的生理条件或疾病过程中,有相当一部分cfDNA会与在健康的时候不同,基于这一结果,近年来cfDNA已被用于无创性诊断。在孕妇中,约有10%-15%的cfDNA来自于胎盘滋养层,现在cfDNA多用于在高危孕妇中筛查胎儿的遗传缺陷,这就是是当前火热的无创唐氏筛查的基础!在肿瘤病人中,通过cfDNA的量化突变来检测肿瘤已被越来越多的人认可。而在移植方面,移植排斥反应也与供体移植器官中的cfDNA水平相关。

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Figure.2 血液中的复杂组分

而循环肿瘤DNA(ctDNA)是来源于肿瘤细胞的cfDNA,属于cfDNA的一种类型。两者为包含关系,ctDNA仅为cfDNA很小的一部分。ctDNA来自肿瘤细胞的体细胞突变,不同于遗传突变的是其存在于体内每个细胞。往往在提到循环肿瘤DNA的时候,大家往往简单的将它认为是肿瘤患者外周血中游离的DNA。其实不然,虽然ctDNA所占cfDNA的比例波动范围非常大,约0.01%~90%,但实际上,大多数ctDNA在cfDNA中的占比约为0.2%。

如何有效分离提取cfDNA(ctDNA)用于检测,已成为科研工作者必须突破的问题!

作为全球领先的创新技术和表观遗传学相关研究产品的开发商和供应商,Epigentek公司为此潜心研发,终推出市场上罕有的游离循环DNA分离提取试剂盒:EpiQuik Circulating Cell-Free DNA Isolation Kit (货号:P-1064),助您在肿瘤研究领域快人一步!

本试剂盒利用基于磁珠的分级筛选ZL技术,从血清/血浆样品中分离出单核小体和二核小体复合体,通过消化使其释放DNA,从而提取游离循环DNA(cfDNA)。

*本试剂盒需配套磁力板,推荐的配套产品为:Q10002-1

试剂盒卓越的优势:

  • 利用基于磁珠的分级筛选ZL技术,确保cfDNA的有效提取,片段长度主要在170bp

  • 快速直接的实验流程,全程仅需2小时。同时无需跑胶,过柱或者离心操作

  • 产品纯度高,有效避免了蛋白质、盐、核酸酶、PCR抑制因子以及其它杂志

  • 灵敏而高效的DNA捕获技术,确保最低80%的DNA提取效率

  • 灵活的实验设计需求,可适用于高通量研究

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Figure.3 简便的实验流程 & 可靠的提取效果


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