5-羟基吲哚乙酸（5-HIAA） ELISA试剂盒使用说明（二）

分析测试百科网 > 行业资讯 > 技术原理

2020.7.06

5、实验所需器材（但试剂盒不提供）

移液器（20；25；50；100；1000μL）

玻璃检测用试管（12×75mm）

旋涡混合器

带储器的8通道移液器

洗涤瓶，自动或半自动包被板清洗系统

酶标仪

双蒸水或去离子水

通风橱

吸水纸，取样吸头，计时器

6、实验前的准备说明

供手动操作和自动操作用：

注意	此96人份的检测试剂可分成3次独立的实验进行。下列体积为用四条包被板（32人份）进行一次检测所需要的试剂的量。如果客户想将标准品的量由7个减为6个，您可去掉标准品G。则实验结果的报告范围相应的减少到3000μg/L

6.1冻干粉或浓缩成分的制备

6.2样品的稀释

样品中5-HIAA脓渡高于最高标准品的应在甲基化后用检测缓冲液进行进一步的稀释。

7、第一天

7.1质控品和病人样品的稀释（除标准外）

样品的准备将导致255倍的稀释。但这已将此考虑到标准品浓渡中。

注意	不要甲基化标准品，它已经被甲基化了。
1）	将质控品和样品分别20μL加入到相应的玻璃试管中。
2）	完成次操作步骤后，请在通风橱内继续操作。
3）	在每一支试管中加入50μL稀释液。旋涡混合器上混合。
4）	在每一试管中加入25μL甲基化试剂。加入试剂后立即混合试管内溶液。注意：反应混合物的黄颜色应当持续稳定，如果颜色迅速消失说明样品中酸的量过大。在这种情况下在向试管中加20μL甲基化试剂。
5）	盖好试管，室温（18-25℃）下温育20min
6）	在每一试管中加入5ml已稀释好的检测缓冲液。用塞子盖好是试管并旋转几次。手动或用混合器上下混合最少五次，以便液体能充分混合。
7）	完成此步骤后就可以不要才通风橱下操作了。
8）	吸取50μL上清液，立即进行ELISA实验。上清液室温下可稳定存放1h。

8.2 ELISA操作

1）	将标准品、甲基化质控品和甲基化病人样品分别50μL加入到相应的微孔。
2）	在每一微孔中加入50μL 5-HIAA生物素。
3）	在每一微孔中加入50μL 5-HIAA抗血清。
4）	盖板，小心振动包被板。2-8℃下温育一夜（16-20h）。

8、第二天

1）	移去金属板，弃取孔内反应液，用250μL洗涤液洗板3次，吸水纸上拍干。
2）	每孔加入150μL临时配置好的酶联物
3)	用一新的粘性金属盖板。室温环境（18-25℃）下，在轨道摇床（500rpm）上温育120min.
4)	在温育结属前大约10min的样子时，向微孔中加入酶联物。
5）	移去金属板，弃去孔内反应液，用250μL已稀释好的洗涤液洗板3次，吸水纸上拍干。
6）	在加入底物液和终止液时，如果有条件的话，可使用8道移液器进行加液。加底物液和终止液必须按相同的时间间隔进行，避免气泡产生。
7）	在每一微孔中加入200μL临时配置好的PNPP底物液。
8）	室温（18-25℃）环境下，在轨道摇床上温育60min。
9）	在每一微孔中加入50μL PNPP终止液以终止反应。轻轻摇动包被板以混合各种成分。
10）	加入终止液后60min之内在405nm处测OD值（参考波长：600-650nm）。

9、参考值

实验结果不能当作进行医疗诊断的唯一因素，医疗诊断还与其它临床观察和其它诊断测试相关。

以下为明显健康人群5-HIAA的正常值：（97.5%）

本译文仅供参考，详情请以原文为准。

互联网

喜欢作者我要约稿