二喹啉甲酸（BCA）检测法测定蛋白质浓度实验
实验方法原理
在碱性环境下蛋白质分子中的肽键结构能与 Cu2＋络合生成络合物，同时将 Cu2＋还原成 Cu＋。而 BCA 试剂可敏感特异地与结合，形成稳定的有颜色的复合物。 在 562nm 处有高的光吸收值。颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，可根据吸收值的大小来计算蛋白质的含童。
实验材料 待测蛋白质样品
试剂、试剂盒 BCANaOH碳酸钠碳酸氢钠五水硫酸铜酒石酸钠
仪器、耗材 分光光度计 37℃水浴锅小烧杯移液管枪头和加样枪试管试管架
实验步骤
1. 溶液
1.1 试剂 A，1L
10 g BCA （1％）
20 g Na2CO3·H2O） （2％）
1.6 g Na2C4H4O6（·2 H2O） （0.16％）
4 g NaOH （0.4％）
9.5 g NaHCO3 （0.95）
加水至 1L，用 NaOH 或固体 NaHCO3 调节 pH 值至 11.25。
1.2 试剂 B，50 ml
2 g CuSO4·5 H2O（4％）
加双蒸水至 50 ml
试剂 A 和试剂 B 在室温下至少稳定 12 个月，并可购买商品化试剂。
1.3 标准工作试剂（SWR）
50 份试剂 A
1 份试剂 B
可稳定一周。
2. 检测
2.1 将 1 倍体积样品与 20 倍体积的 SWR 混合（例如：100 ul 样品加入 2 ml SWR）；
2.2 在室温孵育 2 h（a）或 37℃ 30 min（b）；
2.3 在（b）情况下冷至室温；
2.4 在 562 nm 读取光密度（OD） 值。
注意事项
1. 为促进 BCA 法的反应进程，可将实验试管置于微波炉中孵台 20s 以内。
2. 在样品冷却至室温后。 每 10 min 光吸收值升高 2.3％。
3. BCA 法检测微量蛋白灵敏度 0.5～10 ug/ml，应采用浓缩试剂，并需要在 60℃ 反应 60 min。
4. 与 Lowry 法相比，采用 BCA 法时，如果样品中含有脂类物质将明显提高光吸收值。
5. 在含巯基试剂和去垢剂的缓冲液中 BCA 呈色发生变化。
6. 蛋白质样品经 DOC-TCA 沉淀后，会去除多数干扰物质。
