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苹果酸脱氢酶测定

2020.8.17

实验方法原理

L-苹果酸:NAD 氧化还原酶,MDH。


L-苹果酸 + NAD+⇌ 草酰乙酸 + NADH + H+


实验首选逆反应。

实验材料 MDH 稀释溶液

试剂、试剂盒 磷酸钾NADH草酰乙酸

仪器、耗材 分光光度计

实验步骤

实验所需「试剂」具体见「其他」


0.98 ml 实验混合物


0.02 ml MDH 稀释溶液


25℃ 时,于 340 nm 处吸收值降低。NADPH 的吸收系数 ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。


注意事项

其他

试剂


0.1 mol/l 磷酸钾,pH 7.5


0.01 mol/l NADH(71 mg 溶于 10 ml H2O)


0.1 mol/l 草酰乙酸(Mr=132.1,132 mg 溶于 10 ml 0.1 mol/l 磷酸钾,pH 7.5 中)


MDH 原料溶液(例如 10 mg/ml,用 0.1 mol/l 磷酸钾 pH7.5 稀释至 1 IU/ml)


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