玉米检测试剂盒检测玉米粉中蛋白实验方法介绍

      （1）原理

根据抗原抗体特异性结合的原理，第一步包被，第二步样品中转基因蛋白与包被在酶联板上的相应抗体结合，第三步酶标记的抗体和检测的转基因作物表达的蛋白相结合。结合的酶标记抗体上酶在加入底物后通过酶促反应形成有色物质，颜色深浅用酶联仪测定。

（2）样品提取

称取合适样品放在适当容器中（精确到±0.1g），并按要求吸取一定体积缓冲溶液到样品管，见下表，摇动 10min 后吸取上清液以3000～5000r/min离心5min。

样品取样量和溶液体积

（3）检测

①加入 Bt9 玉米酶标记抗体（Cry9C 蛋白的抗体）包被有 Bt9 玉米抗体的孔中加入 Bt9 玉米的酶标抗体每孔100μL。

②加入样品，按照设计在相应孔中加入对照和样品提取液，每孔100μL，覆盖封口膜防止污染和蒸发，轻敲酶联板大约 30s 混匀。

③室温孵育1h。

④洗板，加入洗液每孔300μL，洗5次。

⑤显色，加入底物溶液每孔 100μL，轻敲30s混匀，室温孵育 10min。

⑥终止反应，室温孵育 10min 后，加入终止液每孔 100μL，按照加入底物溶液的顺序加终止液。

⑦15min 内在酶联仪滤光片单波长 450nm 下读数。