western blot实验中印迹膜和凝胶出现的问题及解决方案 一
Western blot是生物化学和免疫遗传学中常用的一种蛋白分析方法，其技术环节多，操作时间长，哪一步出现问题，都会影响最后的结果，今天小编总结了WB中印迹膜和凝胶中出现的问题及解决方案，希望可以帮助在WB中苦恼的小伙伴。
问题：波浪式的环绕条带
引起原因：转印不均匀
解决方法：当组装三明治结构时，要确保转印堆叠各部分紧密地连接在一起。可能需要更换海绵垫，以达到适合的松紧度。
问题:条带是波浪型的，微笑的，歪斜的
引起原因：
在样本中可能有细胞碎片或者DNA
2.上样buffer不新鲜或者含有太多盐成分。
3.运行凝胶太快，导致凝胶升温，降解聚合物。
解决方法：
增加超声步骤
2.延长加热时间
3.离心
4.尝试准备新鲜的缓冲液，使用不同类型的缓冲液，或通过稀释、透析/微透析或色谱法降低样品缓冲液的盐浓度。
6.选择适当的缓冲液
7.设置适当的电流并保持低电压
问题：泳道内有多个蛋白条带
引起原因：
封闭不完全
2.一抗特异性低
3.一抗浓度过高
解决方法：
更换封闭液。许多常用的封闭液可能屏蔽目标上的表位，使其难以检测。封闭不完全，非特异性结合到不相关的裂解蛋白。用商业的封闭剂代替牛奶可以减少非特异性结合，同时增强抗体与抗原的相互作用。
2.纯化一抗或者更换抗体。
3.增加一抗的稀释比例或者孵育时间，4度孵育可以减少非特异性结合。
问题：剥离的印迹膜仍有条带
引起原因：剥离不完全
解决方法：
优化剥离条件，增加剥离时间，需要确保印迹膜完全淹没在剥离缓冲液中，并在摇床上充分摇动。
2.另一个需要考虑的解决方案是使用荧光标记的二抗进行多重Western blot。使用荧光检测，您可以检测多达四种不同的信号，这取决于您的检测系统。
问题：气泡
引起原因：
膜和凝胶之间有气泡。
2.一抗与印迹接触不足。
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