鳄梨日斑类病毒的检疫防治

检疫方法

鉴别寄主鉴定：将待测材料嫁接至鳄梨（P. Americana）Hass品种的幼苗上，2个月到3年后，嫁接苗木的茎干，子叶上显示黄色、橙色或白色的斑纹或斑点，叶片上有时能显示花斑和扭曲的症状。利用胚胎嫁接或高温（30-32℃）培养能加快症状的形成（Drake等，1974；da Graca等，1981）。也可通过一块在部分纯化的病汁液中浸润的刀具切割茎干来接种ASBVd（Desjardins等，1980)。生物学鉴定方法使用十分普遍，并成功地用来选择无毒地繁殖材料（Wallace等，1978），但该方法的缺点是需要的时间较长。

聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）鉴定：ASBVd能从受侵染的显症或隐症的鳄梨树的叶片、叶柄、花芽组织以及茎干提纯到，类病毒存在于叶绿体组份，细胞质和线粒体组份中不存在（Mohamed等，1980）。提纯方法与其它类病毒相似（Palukaitis等，1980），先用提取缓冲液（2倍体积0.1M pH8.5的Tris-HCl，1M NaCl，1%的SDS，0.5%的DIECA，1g/10g组织的 PVP）温育磨粹的植物组织，酚氯仿抽提释放核酸，后用methoxyethanol抽取以除去植物组织中的多糖，上清液乙醇沉淀，经CF-11纤维素柱纯化即得到类病毒核酸粗提液。此粗提液经聚丙烯酰胺凝胶双向电泳后，环状的类病毒RNA条带与植物组织的RNA分开，环状的RNA具有侵染性（Allen等，1981），切下特异的类病毒条带，洗脱凝胶，得到高度纯化的类病毒核酸。纯化的核酸通过机械接种至鳄梨（P. Americana）Hass品种的幼苗上，观察其出现的症状进一步确认类病毒是否存在。

核酸杂交：由于鉴别寄主症状形成较慢，用标记的互补DNA作探针进行核酸杂交能较容易地鉴定ASBVd，其灵敏度较PAGE法高出1000倍（Palukaitis 等，1981；Allen 等，1981）。

RT-PCR：根据报道的序列合成专化性的PCR引物进行反转录PCR检测，其灵敏度高，快速简易，能同时处理多个样品，但易产生假阳性。

检疫措施：

禁止从疫区进口鳄梨及其相关的繁殖材料。

防治方法：

利用无毒繁殖材料：ASBVd能够通过种子传播，种植健康的繁殖材料是有效的防治措施。然而ASBVd在很多鳄梨品种上不表现出症状，因而选育繁殖材料时需用上述方法进行检测。

污染器械的消毒：ASBVd在无症带毒的田间植株上普遍存在，且易于通过污染的刀具传播至健康的植株，因此，已污染园地农事工具的彻底消毒对该病的防治十分重要。用5%地家用漂白粉（次氯酸钠）、1：1混合的2%的甲醛+2%的NaOH，或者6%的过氧化氢能有效灭活污染器械上的ASBVd（Desjardin等，1987）。

利用无症的耐病品种： Wallace（1967）认为无症品种被ASBVd侵染后产量损失较小，在疫区可以用来控制该病害。然而，无症的品种可作为ASBVd的初侵染源，对该病害的控制可能会进一步复杂化，因而有必要对此方法的可行性进行深入研究。