关注公众号

关注公众号

手机扫码查看

手机查看

喜欢作者

打赏方式

微信支付微信支付
支付宝支付支付宝支付
×

载体构建中常用的选择标记基因和报告基因是什么

2022.8.09

报告基因的主要作用是标记转化细胞,起报告和识别作用。常用的有Gus基因(β-葡萄糖苷酸酶基因),该基因来自大肠杆菌染色体上的uidA座位,编码β-葡萄糖苷酸酶。绝大多数植物不存在内源的Gus基因活性,因而Gus基因被广泛用作转基因植物的报告基因。常用的检测方法有组织化学染色定位法、荧光检测法和分光光度检测法。

冠瘿碱基因也应用于转化载体,作为筛选标记。其中Nos基因和Ocs基因应用得最为广泛,由于在细菌中不表达,它们在植物组织中的出现,通常作为已发生遗传转化的证据。

GFP基因(绿色荧光蛋白基因)也是较好的报告基因。基因产物绿色荧光蛋白最初是从多管水母(Aequoreavictoria)中发现的一种蛋白质,分子质量为27~30ku,发光基团是其咪唑环。GFP在波长395nm和470nm的光激发下,产生508nm的绿色荧光。该蛋白无种属依赖性,可在多种生物中表达,所产生的荧光强度较高,用普通荧光显微镜就可观测到,甚至可对植物活体进行检测,也不需要反应底物或辅助因子。若GFP的肽链中个别氨基酸改变,则产生不同颜色的荧光。GFP作为报告基因具有直观、方便且应用范围广等特点。

此外,用作报告基因的还有NptⅡ基因、Cat基因(氯霉素乙酰转移酶基因)、β-半乳糖苷酸酶基因等。


推荐
关闭