PCR 产物纯化实验

2019.9.12

试剂、试剂盒	TE 或去离子水 PCR 产物
仪器、耗材	离心机和转子 PCR 滤件微量离心管
实验步骤	一、材料 1. 缓冲液和溶液 TE(lOmmol/L Tris-HCl，lmmol/L EDTA，pH7.5) 或去离子水 2. 核酸和寡核苷酸待测序的 PCR 产物 3. 离心机和转子带有固定倾角转子的小型离心机，如 Eppemlorf5415C 4. 特殊设备 AmiconMicrocon-PCR 滤件（Millipore) 或者相当的产品，微董离心管或接收管二、方法 1. 对每一个待纯化的 PCR 产物，都在接收管中放置一个滤件，滤件的储液面向上储液池中加入 400ul 去离子水或 TE，注意加样时不要触及膜。加入 100ulPCR 产物，避免带进矿物油。如果 PCR 产物不足 100ul, 用去离子水或 TE 补足，盖上盖子。 2. 将 1 中所得组合体用带有固定倾角转子的离心机，l000 g 离心 15 min(例如，Eppendorf5415C 离心机上 3300r/min)。注意盖子和管的结合部朝向转子的中央。 3. 移去滤件，将其放入一干净的收集管中，有膜面朝上（如果愿意，滤件可以一直存到样品分析结束）。在滤件上小心地加 20ul 去离子水或 TE，注意不要触及膜，然后将滤件反转过来，放回到干净的收集管中，使带有液体的一面朝下。 4.1000 g 离心 2 min, 收集纯化的片段。展开

试剂、试剂盒

TE 或去离子水 PCR 产物

仪器、耗材

离心机和转子 PCR 滤件微量离心管

实验步骤

一、材料

1. 缓冲液和溶液

TE(lOmmol/L Tris-HCl，lmmol/L EDTA，pH7.5) 或去离子水

2. 核酸和寡核苷酸

待测序的 PCR 产物

3. 离心机和转子

带有固定倾角转子的小型离心机，如 Eppemlorf5415C

4. 特殊设备

AmiconMicrocon-PCR 滤件（Millipore) 或者相当的产品，微董离心管或接收管

二、方法

1. 对每一个待纯化的 PCR 产物，都在接收管中放置一个滤件，滤件的储液面向上

储液池中加入 400ul 去离子水或 TE，注意加样时不要触及膜。加入 100ulPCR 产物，避免带进矿物油。如果 PCR 产物不足 100ul, 用去离子水或 TE 补足，盖上盖子。

2. 将 1 中所得组合体用带有固定倾角转子的离心机，l000 g 离心 15 min(例如，Eppendorf5415C 离心机上 3300r/min)。注意盖子和管的结合部朝向转子的中央。

3. 移去滤件，将其放入一干净的收集管中，有膜面朝上（如果愿意，滤件可以一直

存到样品分析结束）。在滤件上小心地加 20ul 去离子水或 TE，注意不要触及膜，然后将滤件反转过来，放回到干净的收集管中，使带有液体的一面朝下。

4.1000 g 离心 2 min, 收集纯化的片段。

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周锦帆