pUC18 和 pUC19质粒图谱
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pUC18 和 pUC19质粒图谱
pUC18 和 pUC19 大小只有 2686bp ，是最常用的质粒载体，其结构组成紧凑，几乎不含多余的 DNA 片段，GenBank注册号为 L08752(pUC18)和 X02514(pUC19)。由 pBR322 改造而来，其中 lacZ (MSC)来自 M13mp18/19 图 3-4 是其质粒图谱 。
这两个质粒的结构几乎是完全一样的，只是多克隆位点的排列方向相反。这些质粒缺乏控制拷贝数的 rop 基因，因此其拷贝数达 500-700 。 pUC 系列载体含有一段 lacZ 蛋白氨基末端的部分编码序列，在特定的受体细胞中可表现 α-互补作用。因此在多克隆位点中插入了外源片段后，可通过 α-互补作用形成的蓝色和白色菌落筛选重组 质粒。
特征序列区位：
&NBS p;
| pBR322_origin | &NBS p; | 1471 - 852 |
| Ampicillin | 2486 - 1626 | |
| lac_promoter | 543 - 514 | |
| AmpR_promoter | 2556 - 2528 | |
| M13_pUC_rev_primer | 500 - 478 | |
| M13_reverse_primer | 479 - 461 | |
| M13_forward20_primer | 379 - 395 | |
| M13_pUC_fwd_primer | 364 - 386 | |
| lacZ_a | 398 - 250 | |
| pGEX_3_primer | 51 - 29 | |
| Orf2 | 2486 - 1626 |
NOS terminator sequence:
ggatccatcgttcaaacatttggcaataaagtttcttaagattgaatcctgttgccggtcttgcgatgattatcatataatttctgttgaattacgttaagcatgtaataattaacatgtaatgcatgacgttgtttatgagatgggtttttatgattagagtcccgcaattatacatttaatacacgatagaaaacaaaatatagcgcgcaaactaggataaattatcgcgcgcggtgtcatctatgttactagtaatcgat
设计引物：
Forward primer: 5’ ggaGGATCCggatccatcgttcaaac 3’ (含BamH I 位点GGATCC及三个保护碱基)
Reverse primer: 5’ atcGAATTCATCGATTACTAGTAACATAG 3’ (含EcoR I 位点GAATTC及三个保护碱基)
请查一下NOS终止子序列内有没有这两个酶切点。如果没有，引物合成后，以任何一种pCAMBIA为模板都能扩增到该终止子序列。
