利用CORTECS实心核颗粒色谱柱进行HPLC梯度方法转换
简介
将使用填充了大颗粒的大体积色谱柱的HPLC梯度方法转换至填充高效CORTECS 2.7 μm颗粒的小体积色谱柱，可轻松缩短分析时间、节省溶剂与样品消耗量，最终节约成本。在转换HPLC梯度方法时，可通过适当调整方法条件和选择相当的色谱柱填料来避免对色谱分离性能的影响。
下述应用纪要展示了针对阿巴卡韦相关化合物的典型HPLC梯度方法进行适当的方法转换。阿巴卡韦(Ziagen®)是一种核苷类逆转录酶抑制剂，被用于抗HIV的治疗。该样品由五种化合物组成，其中四种为主要成分阿巴卡韦的相关物质，如图1所示。此类检测常用的色谱柱为全多孔C18, 5 μm, 4.6 x 150 mm色谱柱。通过转换为CORTECS C18, 2.7 μm色谱柱，可大大缩短该梯度方法的分析时间，同时还能保持目标峰的选择性和分离度。
结果与讨论
基于此类检测常用的色谱柱为全多孔C18, 5 μm色谱柱，因此选择CORTECS C18, 2.7 μm填料用于方法转换。向2.7 μm颗粒填充的色谱柱转换时需要75 mm的色谱柱长度来保持L/dp比例。该方法转换中选择4.6 x 75 mm的色谱柱。色谱柱长度的变化需要将进样体积从8 L调整为4 μL。因为色谱柱的内径并无变化，所以仅根据填料粒度的变化来调整流速。调整后的流速经计算为1.85 mL/min。色谱柱配置与流速的调整需要对每个时间段的梯度进行调整，从而确保在同等色谱柱体积条件下进行分离。
表1和图2显示了方法转换的对比情况。采用CORTECS C18, 2.7 μm色谱柱的转换方法与采用全多孔C18, 5 μm色谱柱的方法具有相同的选择性。同时还保持了两对关键峰的分离度值。CORTECSC18, 2.7 μm, 4.6 x 75 mm色谱柱生成的反压为4400 psi，完全在HPLC仪器的压力限值(5000 psi)内。将HPLC梯度法转换至CORTECS C18, 2.7 μm色谱柱，分析时间缩短约四倍，同时溶剂消耗量节省了两倍。
结论
可轻松将使用填充大颗粒的大体积色谱柱的HPLC梯度方法转换至填充高效CORTECS颗粒的小体积色谱柱。本应用纪要介绍对阿巴卡韦相关物质的典型HPLC梯度方法的进行成功转换，其通量增加了约四倍，同时保持了色谱分离性能。除了节省了时间外，溶剂消耗量还降低了约两倍。当采用CORTECS C18, 2.7 μm, 4.6 x 75 mm色谱柱时，所生成的反压为4400 psi，完全在HPLC仪器的压力限值(小于5000 psi)内。HPLC梯度方法向CORTECS 2.7 μm色谱柱转换时增加了通量，降低了溶剂消耗量，从而大大节约了成本。
