α7nACh 受体的竞争性拮抗剂对实验小鼠学习记忆...（一）

α7nACh 受体的竞争性拮抗剂对实验小鼠学习记忆能力的影响

摘要:目的　探讨α7nACh 受体的竞争性拮抗剂(MLA) 对实验小鼠在Morris 水迷宫中学习记忆能力的影响。

方法　雄性昆明小鼠每天腹腔注射MLA (110、418μg/ g ) ,连续8d ,采用Morris 水迷宫,通过定位航行、空间探索试验观察分析小鼠的学习记忆能力。结果　小鼠腹腔注射MLA 418μg/ g 与其余三组相比,寻找平台潜伏期明显延长( P < 0101) ,在目标象限游泳时间所占百分比也明显降低( P < 0101) ,结论　腹腔注射MLA 418μg/ g的小鼠有学习和记忆能力的下降。

关键词:α7nACh 受体的竞争性拮抗剂;Morris 水迷宫;学习记忆能力;小鼠

　　α7nACh 受体的竞争性拮抗剂是燕草属植物飞燕草子(Delphinium spp1) 的提取物甲基牛扁亭(methyllycaconitine ,MLA) ,为一种植物毒素[1 - 2 ] 。近年来的动物实验研究表明, MLA 通过对α7nACh 受体的竞争性拮抗, 导致动物认知功能障碍[3 - 4 ] 。本实验采用腹腔注射法, 用Morris 水迷宫检测小鼠的学习记忆能力, 拟建立一种模拟α7nACh 受体损伤的痴呆模型, 以进一步为研究α7nACh 受体在阿尔茨海默病等退行性神经系统疾病的作用机理和针对治疗α7nACh 受体损伤的药物开发提供实验依据。

1 　材料和方法

111 　实验动物和分组　选用健康雄性3 个月龄昆明小白鼠(购自宁夏医学院实验动物中心) 85 只,随机选取35 只用于确定最大逃逸潜伏期实验,其余50 只,在正式开始实验的前一天,小鼠依次在Morris 水迷宫中自由游泳2min ,选取游泳姿势和速度符合要求的小鼠40 只,随机分为4 组,每组各10 只。1) 正常对照组:小鼠自由进食饮水,自然昼夜节律光照;2) 生理盐水组:注射等量生理盐水;3) 110μg/ g组:每天注射MLA 110μg/ g ,连续8d ;4) 418μg/ g 组:每天注射MLA 418μg/ g ,连续8d。

112 　试剂和仪器　MLA:粉剂,购自Sigma 公司。Morris 水迷宫及微机生物机能系统,购自成都泰盟科技有限公司。

113 　MLA 溶液制备及给药剂量　临用前将110μg/ g 和418μg/ g 的MLA 分别溶解于生理盐水中,按011mL/ 10g 的

剂量连续注射8d。

114 　Morris 水迷宫行为测定　水迷宫为圆形水池,池壁为乳白色,壁上标有东、南、西、北四个入水点,将水池等分为SW、MW、SE 及NE 四个象限,在SW象限正中放圆形透明平台,平台顶低于水面1cm ,水温(26 ±1) ℃,水中加入适量牛奶,至看不清水下平台。迷宫正上万悬挂摄像机并连接计算机等记录显示系统,实验期间保持环境安静,迷宫外参照物(如门、窗、冰箱、电灯) 等保持不变。

11411 　最大逃逸潜伏期的确定:选取的35 只小鼠,分上、下午两个时段进行水迷宫训练,每个时段训练4 次,训练时小鼠先自由游泳2min ,适应环境后将小鼠面向池壁放入水中,记录每次从入水点至找到平台的最大时限。训练时操作者随机选择一个入水点,但在同一个训练时段内,每只小鼠的入水点相同。120s 内找不到平台,将小鼠引导至平台上休息10s ,连续2d ,记录找到平台的时间。实验结束后,

选取90 %以上小鼠找到平台的时间,确定为最大逃逸潜伏期。

11412 　注射MLA 动物定位航行试验(place navigation) :将筛选并分组的小鼠,从第1 天起,按11411 方法训练5d ,记录潜伏期及游泳速度,取后3d 的算术平均值进行统计分析。注射MLA 后按同样的方法继续训练,连续8d ,取8d 的算术平均值进行统计分析。

11413 　注射MLA 动物空间搜索试验( spatial probe test) :在训练第5d 和注射MLA 8d 后,撤除水下平台,于平台象限池壁中点为入水点,记录小鼠120s 内搜寻平台在各象限的游泳时间。

115 　统计学方法

所有数据用(.x ±s) 表示,采用单因素方差分析(Oneway ANOVA) ,方差齐性时,用LSD(Le Significant Difference)或Student Newman Keuls 检验进行两两比较,方差不齐时,用秩和检验,组间比较Kruskal Wallisttest。采用SPSS 1110 统计软件对数据进行统计分析。