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关于细胞色素C的合成方法介绍

2022.4.29

  一、将新鲜或冷冻猪心,洗净,去血块、脂肪和肌腱等,切条,用绞肉机绞碎。然后加入1.5倍的水,用1mol/L的硫酸调节pH值为4左右,常温下搅拌,浸提2h,压滤。滤液用1mol/L的氨水中和至pH=6.2,离心分离取清液。残渣再用等量水重复提取一次,合并两次提取液。提取液用2mol/L氨水调pH值为7.5,静止沉淀杂蛋白,离心,吸取上层清液。然后按每升提取液加入10g沸石,在不断搅拌下充分吸附40min,静置,弃去上层清液。用蒸馏水洗涤吸附有细胞色素C的沸石3次,用0.2%的氯化钠洗涤4次,再用蒸馏水洗至洗涤液澄清。过滤沸石,抽干,装入色谱柱中,并用25%的硫酸铵溶液洗脱,收集洗脱液。洗脱液中加入固体硫酸铵使浓度达45%,杂蛋白完全析出,过滤。滤液中缓慢加入三氯乙酸(20%)溶液,边加边搅拌,待细胞色素C沉淀完全析出后,离心收集沉淀。将沉淀溶于蒸馏水,用水透析至无硫酸根离子。将透析后溶液通过已处理好的Amberlite IRC50(NH+4)树脂柱吸附,用水洗涤至澄清,再用磷酸氢二钠(0.6mol/L)和氯化钠(0.4mol/L)混合液洗脱,洗脱速要慢,一般流速为2ml/min。洗脱液再用蒸馏水透析至无氯离子为止,可得细胞色素C精品溶液。收率为100~150mg/kg,含量大于20mg/ml。

  二、以新鲜酵母为原料的提取法

  用途

  1.细胞呼吸激活药。对组织中细胞的氧化、还原过程具有迅速的酶促作用。用于急救或辅助治疗中因各种原因引起的组织缺氧。对抗癌药物引起的白血球降低,四肢循环障碍,肝疾患,肾炎亦有一定的治疗作用。

  2.适用于治疗由脑缺氧、心肌缺氧和其他组织缺氧引起的一系列症状。本品尚能促进受损肝细胞再生、骨髓造血机能修复,显著减轻由放疗引起的白细胞减少症。

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