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琼脂糖凝胶电泳的原理

2022.6.09

通过荧光染料染色来确定 DNA 的位置, 通过在紫外线下检查凝胶,荧光染料可以检测多达 20 pg 的双链 DNA。琼脂糖凝胶的分辨率比聚丙烯酰胺凝胶低,但分离范围更大。 在这个过程中,50 bp 到几兆碱基的 DNA 可以在琼脂糖凝胶中分离(最适合 50-20,000 bp)。

琼脂糖是一种线性聚合物,它包含交替的d - 和l-半乳糖由 α(1-3) 和 β(1-4) 键连接,在 3 和 6 位之间具有脱水桥。它凝胶化以形成尺寸范围从 50 到 ≥  200  nm的三维通道网格。DNA 样本的迁移率取决于前一章所述的各种因素。因素之一是 DNA 样本的大小。


琼脂糖凝胶电泳是的方法凝胶电泳中使用的生物化学,分子生物学,遗传学和临床化学大分子如DNA或蛋白质的混合群体中的基质中分离的琼脂糖,的两个主要部件中的一个的琼脂。蛋白质可以按电荷和/或大小分开(等电聚焦琼脂糖电泳基本上与大小无关),而DNA和RNA片段可以按长度分开。

通过施加电场分离生物分子将带电分子移动通过琼脂糖基质,生物分子在琼脂糖凝胶基质中按大小分开。

琼脂糖凝胶易于浇铸,带电基团相对较少,特别适合分离实验室中最常遇到的大小范围的DNA,这也是其使用广泛的原因。分离的 DNA 可以用染色剂观察,最常见的是在紫外线下,DNA 片段可以相对容易地从凝胶中提取。大多数使用的琼脂糖凝胶溶解在合适的电泳缓冲液中的 0.7-2% 之间。


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