应用人胎肝细胞研究核糖核酸酶P的M1-RNA的介绍

　　研究抗组织相容性复合物(MHC)Ⅱ类分子转录激活因子(CⅡTA)核糖核酸酶P(RNaseP)抑制肝细胞表面MHCⅡ分子的表达。

　　方法 ：M1—RNA是RNaseP的催化活性单位，设计并克隆针对CⅡTA第629位点的M1—RNA(M1—629—GS)及其对应的CⅡTA靶序列，分别插入腺相关病毒载体psNAV(psNAV—M1—629—GS)及pGEM—7zf(+)载体(pGEM—629)，进行体外转录和切割反应鉴定其活性。通过纳米载体介导psNAVM1—629—Gs稳定转染人胎肝细胞，流式细胞术检测MHCⅡ类抗原表达，逆转录聚合酶链反应检测CⅡTA mRNA水平。

　　结果 ：M1—629—GS与pGEM—800体外切割产物电泳见预期切割条带(553nt和176nt)。psNAVM1—629—GS^+肝细胞表面人白细胞抗原(HLA)—DR、DP、DQ的诱导型表达分别为(1．01±0．51)%、(4．37±1．28)%、(1．98±0．42)%，对照组psNAVM1—452—GS^+分别为(10．81±3．09)%、(40．12±2．60)%、(5．71±0．11)%，两组比较分别下调90．65%、89．11%及65．32%．；psNAV—M1—629—GS^+克隆诱导型CⅡTA mRNA与β—actin比值为0．94±0．25，空载体组比值为2．30±0．49，M1—629—GS可明显下调CⅡTA mRNA含量(t=5．56，P≤0．01)。

　　结论 ：抗CⅡTA RNaseP—M1—629—GS可发展为新一代抗肝移植排斥的核酸药物。