尿激酶的鉴别及检查方法

鉴别

取效价测定项下的供试品溶液,用巴比妥-氯化钠缓冲液(pH7.8)稀释制成每1ml中含20单位的溶液,取lml,加牛纤维蛋白原溶液0.3ml,再依次加入牛纤维蛋白溶酶原溶液0.2nl与牛凝血酶溶液0.2ml,迅速摇匀,立即置37℃士0.5℃恒温水浴中保温,立即计时。应在30~45秒内凝结,且凝块在15分钟内重新溶解。以0.9%氯化钠溶液作空白,同法操作,凝块在2小时内不溶(上述试剂的配制同效价测定)。

检查

溶液的澄清度与颜色取本品,加0.9%氯化钠溶液溶解并稀释制成每1ml中含3000单位的溶液,依法检查(通则0901第一法与通则0902第一法),应澄清无色。干燥失重取本品,以五氧化二磷为干燥剂,在60℃减压干燥至恒重,减失重量不得大于5.0%(通则0831)分子组分比取本品,加水溶解并稀释制成每1ml中含2mg的溶液后,加人等体积的缓冲液[取浓缩胶缓冲液(F液)2.5ml、20%十二烷基硫酸钠溶液2.5ml、0.1%溴酚蓝溶液0ml与87%甘油溶液3.5ml,加水至10ml,置水浴中3分钟,放冷,作为供试品溶液,取10l,加至样品孔,照电泳法(通则0541第五法考马斯亮蓝法染色)测定,按下式计算高分子量尿激酶相对含量(%)。高分子量尿激酶相对含量(%)=高分子量尿激酶的峰面积高、低分子量尿激酶的峰面积之和×100%乙肝表面抗原取本品,加0.9%氯化钠溶液溶解并稀释制成每1ml中含10mg的溶液,按试剂盒说明书项下测定应为阴性异常毒性取本品,加氯化钠注射液溶解并稀释制成每lml中含5000单位的溶液,依法检查(通则1141),应符合规定细菌内毒素取本品,依法检查(通则1143),每1万单位尿激酶中含内毒素的量应小于1.0EU凝血质样活性物质血浆的制备取新鲜兔血,加3.8%枸橼酸钠溶液(每9ml兔血加3.8%枸橼酸钠溶液1ml),混匀,在2~8℃条件下,以每分钟5000转离心20分钟。取上清液在一20℃速冻保存备用,用前在25℃融化测定法取本品,加巴比妥缓冲液(pH7.4)溶解并稀释制成每1ml中各含5000单位、2500单位、1250单位、625单位与312单位的供试品溶液。若供试品中含乙二胺四醋酸盐或磷酸盐,必须先经巴比妥缓冲液(pH7.4)在2℃透析除去,再配成上述浓度的溶液。取小试管(12mm×75mm)7支,在第1管和第7管各加巴比妥缓冲液(pH7.4)0.1ml作空白对照,其余5管分别加人上述倍比稀释的供试品溶液各0.1ml,再依次加入6-氨基己酸溶液[取6-氨基己酸1.97g,加巴比妥缓冲液(pH7.4)使溶解,并稀释至50m与血浆各0.1ml,轻轻摇匀,在25℃水浴中,静置3分钟,加入已预温至25℃的氯化钙溶液(取氯化钙1.84g,加水使溶解并稀释至500ml)0.1ml,混匀,置水浴中,立即计时。注意观察血浆凝固,终点判断为轻轻倾斜试管置水平状,溶液呈斜面但不流动,记录凝固时间(秒)。每个浓度测3次,求平均值(3次测定中最大值与最小值的差不得超过平均值的10%)。以供试品溶液浓度的对数为纵坐标,复钙缩短时间(空白管的凝固时间减去供试品管的凝固时间)为横坐标绘图。连接不同稀释度的供试品各点,应成一直线,延伸直线与纵坐标轴的交点为供试品浓度,即凝血质样活性为零值时的供试品酶活力,按每1m供试品溶液的单位表示,每1ml应不得少于150单位。