人Visfatin定量EIA试剂盒使用说明

原理

本实验采用双抗体夹心 ELISA法。用抗人Visfatin单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 Visfatin与单抗结合，加入酶标抗体，形成免疫复合物连接在板上，加入酶底物TMB，出现蓝色，加终止液硫酸，颜色变黄，在450nm处测OD值，Visfatin浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中Visfatin浓度。

试剂盒组成（2-8℃保存）

准备试剂与收集血样

1. 收集标本：血清、血浆（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反复冻融。

2. 标准品第一次使用时用0.5ml的蒸馏水溶解，放置半小时混匀后使用，用后放在-20oC保存。溶解后浓度分别为180、100、40、20、10ng/ml。

3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。

4. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）

检测程序

1. 建立标准曲线：设标准孔6孔，每孔各加入标准品50ul。第六孔加入标本稀释液50ul，设为空白对照。

2. 每孔加酶标抗体工作液50ul。将反应板置37℃反应120分钟。

3. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。

4. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗处反应15分钟。

5. 每孔加入100ul终止液混匀。

6. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

结果计算与判断

1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。

2. 以标准品180、100、40、20、10、0ng/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。

3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应Visfatin含量。

试剂盒性能

  1.   灵敏度：最小的Visfatin 检测浓度小于5ng/ml。

2. 特异性：可同时检测重组或天然的人Visfatin。不与人其它细胞因子有交叉反应。

3. 重复性：板内、板见变异系数均小于10％。

注意事项

  1.   以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。

 2.   洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。

  3.   板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。

  4.   本试剂盒宜置4oC冰箱保存。

 5.   本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！