淋巴细胞增殖功能的测定实验
实验方法原理 | T细胞、B细胞表面具有识别抗原的受体和有丝分裂原受体,在特异性抗原刺激下可使相应淋巴细胞克隆发生增殖。植物血凝素(PHA)、刀豆蛋白A(ConA),抗CD2、抗CD3 McAb作为多克隆刺激剂可选择性地刺激T细胞增殖;而抗IgM、含葡萄球菌A蛋白的菌体(SAC)、脂多糖(LPS,对小鼠有作用)则刺激B细胞发生增殖;美洲商陆(PWM)、肿瘤刺激剂PMA对T、B细胞的增殖均有刺激作用。最近发现,integrin家族中VLA组中某些受体与相应配体结合后也能活化T细胞。目前临床上最常选用PHA刺激PBMC,根据形态学或氚标记胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入率测定T细胞的增殖水平。 |
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实验材料 | PBMC |
试剂、试剂盒 | 闪烁液 RPMI1640 CO2孵箱 |
仪器、耗材 | 细胞收集仪 β液闪仪 |
实验步骤 |
1. 无菌从肝素抗凝血中分离外周血单个核细胞(PBMC)洗涤后用10%FCS RPMI1640调整细胞数为1~2x106/ml (1)增殖水平直接用CPM值表示。 (2)也可用刺激指数(SI)表示
PHA(或实验组)cpm-机器本底
SI=───────────────
阴性对照组cpm-机器本底
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注意事项 |
1. 注意无菌操作。
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其他 |
来源:医学基础免疫学实验指导,主编金伯泉李恩善,第1 版,北京:世界图书出版社,1990
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