通过串联删除吸水链霉菌5008的γ丁内脂受体基因...（二）

通过串联删除吸水链霉菌5008的γ丁内脂受体基因提高井冈霉素产量

2. afsA及arpA同系物参与井冈霉素生物合成

分别删除afsA以及arpA同系物。shbA1失活导致井冈霉素产量下降超过90%；ShbA2和shbA3失活分别导致产量下降77%和61%（Fig 3A）。ΔshbR1和ΔshbR3能够显著增加井冈霉素的产量分别为26%和20%。ShbR2删除井冈霉素产量无显著改变。以上结果说明删除arpA（shbR1和shbR3）同系物能够提高井冈霉素生物合成，而删除afsA同系物能抑制其合成。

3. ShbR1通过双向调控机制抑制adpA-H转录

接下来作者研究了ShbR1对adpA-H转录的调控作用。ShbR1突变24h时adpA-H转录水平显著上调（Fig 4A）。EMSA实验表明ShbR1能够绑定adpA-H启动子区域（Fig 4B）。以上结果表明ShbR1能够通过直接绑定adpA-H启动子来抑制其转录。删除shbR1 48小时前，shbR3转录水平显著下调（Fig 4C）。EMSA实验还显示shbR1也能够结合到shbR3和shbA3的基因间区（Fig 4D）。shbR1可能能够通过结合到shbR3启动子正向调控shbR3。ShbR1能够通过直接作用和间接作用抑制adpA转录。

4. 共同失活shbR1/R3能增加井冈霉素产量

通过对野生型以及shbR突变菌株发酵随时间变化进行观测，发现发酵后期，井冈霉素产量和产率在shbR1/shbR3共同突变时相对野生型增加55%和95%（Fig 5A）。井冈霉素终产量也在shbR1/shbR3共同突变比分别突变shbR1和shbR3显著提高。shbR1突变和shbR1/R3共同突变时，相比野生型，细胞增长在发酵48小时后下降（Fig 5B）。同时shbR1/R3共同突变时，adpA-H和valABC转录水平比野生型或者shbR1单独突变时高（Fig 5CD）。