荧光原位杂交在非整倍体植入前诊断中的应用实验 二

三、探针制备、杂交及洗脱

探针混合物

1.三色探针混合：先将盛探针的三个离心管离心，然后用涡旋振荡器振荡理想的探针及 LSI 探针杂交缓冲液 10s。配 IOjuL 的探针杂交液，也就是 13、18 和 21 号染色体探针各取 lfxL，加到盛有 7；xLLSI 探针杂交缓冲液的微量离心管中，振荡混勾、离心。

2.仅一个染色体的探针，则探针混液组成为 IyL 探针、2pLHPLC 级纯水和 7pL 杂交缓冲液。对于 CEPX 和 CEPY 探针混合物，将探针和 CEP 杂交缓冲液振荡并离心。l 〇/xLCEPX 和 CEPY 探针混合物工作液组成：I1^LCEPX. 和 CEPY 的探针混合物、2 斗 HPLC 级纯水和 CEP 杂交缓冲液。

3.MdtiVysion 的 5 色探针混合物是可以直接使用。用前先离心，振荡混匀。所有的探针混合物工作液都可以一 20°C 保存几个月（在厂家提供的有效期内)。

杂交程序

1.杂交前，先用金刚石笔将 22 mmX30 mm 的盖玻片切成 8 mmX8 mm 的小块，放在有盖的玻璃培养皿内备用。

2.封口膜剪成约 22 mmX22 mm 大小，放在皿内备用。

3.准备杂交湿盒：用消毒过的水浸湿纸巾后放入一玻璃皿内，再放一玻片架，加盖后放于 37°C 温箱预温备用。

4.从一 20°C 取出要杂交的探针混合物工作液，离心 IOs 后振荡混匀。

5.用微量移液器将 2!uL 探针混合物工作液加于玻片上标记好的染色质区域后，迅速用镊子将 8 mmX8 mm 盖玻片盖上，注意不要有气泡而影响杂交。若出现气泡，用镊子轻压盖玻片将气泡赶出。

6.用橡皮泥或封口膜将盖玻片封口。用封口膜时要注意压下盖片周围，以确保封口膜都粘在玻片上（见注释 2)。

7.将玻片置于 69°C 的玻片电热板上 8 min，使探针和标本 DNA 同时变性。

然后将玻片标本迅速移到 37°C 温箱预热的湿盒中进行杂交（见注释 3 和 4)。