猪 O 型口蹄疫合成肽结构蛋白 ELISA 抗体检测试剂盒说...
猪 O 型口蹄疫合成肽结构蛋白 ELISA 抗体检测试剂盒说明书
通用名：猪 O 型口蹄疫合成肽结构蛋白 ELISA 抗体检测试剂盒（
英文名：Test Kit for Antibodies to Porcine Foot and Mouth Disease Virus O （ELISA）
【包装规格】 96T×1/盒、96T×2/盒
【预期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus，FMDV）引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，其特征为口腔黏膜、蹄部、乳房皮肤发生水泡和烂斑。
本试剂用于检测猪血清中口蹄疫病毒 O 型抗体，可用于口蹄疫病毒 O 型疫苗免疫效果评价。
【原 理】
本试剂盒系由预包被口蹄疫病毒O型VP1抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测猪血清、血浆样本中猪口蹄疫病毒O型抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有猪口蹄疫病毒O型抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有口蹄疫病毒O型抗体。
【试剂盒组成】
【储存及有效期】 于 2～8℃避光保存，有效期为 12 个月。
包被板开封后请于 2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为 2 个月。
【适用仪器】 含 450nm、630nm 波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。
【样品准备】
1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品 1 周内可于 2～8℃保存，长期需置-20℃保存。
2.用样品稀释液将待检血清按 40 倍稀释（如 5μl 血清加入 195μl 样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。
3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作 20 倍稀释。
【检验方法】
1.使用前将试剂盒置室温 30 分钟，恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条，设空白对照 1 孔、阴性/阳性对照各 2 孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。
3.空白对照孔加样品稀释液 100μl；阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照 100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品 100μl。
4.混匀，置 37℃反应 30 分钟。
5.扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，重复洗涤 5 次，拍干。
6.每孔加酶标记物 100μl（空白孔除外）。置 37℃反应 30 分钟。
7.洗涤，同步骤 5。
8.每孔依次加底物液 A、底物液 B 各 50μl，混匀，37℃避光反应 10 分钟。
9.每孔加终止液 50μl，混匀，于 450nm(可用 630nm 作参比波长）测定各孔吸光值（A 值），无参比波长用空白孔调零(即所有孔吸光值减去空白孔吸光值)。
【参考值】 实验正常的情况下，阴性对照≤0.10，阳性对照≥0.6。
【检验结果的解释】
1.样品 A 值≥0.38 为阳性；样品 A 值在 0.2 到 0.38 之间为可疑；样品 A 值＜0.2 为阴性。
2.本实验结果为阴性或可疑时表明猪只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。
【试验方法的局限性】
该试验仅作为定性检测猪血清、血浆中猪口蹄疫病毒 O 型抗体，根据 A 值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。
【注意事项】
1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。
2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。
4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。
5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。
6.用于检测的样品应保持新鲜。
7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
8.不同批号试剂组分不得混用。
