外周血单个核细胞的分类

　　一、基本原理

　　外周血单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞，其比重为1.070左右，而红细胞和多核白细胞的比重超过1.080。这样利用介于两者比重之间的溶液(称为分层液)做密度梯度离心，就可得到单个核细胞。最常用的分层液为聚蔗糖和泛影酸钠混合比重为1.070±0.001的溶液，国内常用泛影葡胺代替泛影酸钠。

　　二、试剂与器材

　　1、聚蔗糖—泛影葡胺分层液，Hank’s液，RPMI-1640培养液，肝素。

　　2、水平离心机。

　　三、操作步骤

　　1、取外周静脉血，用肝素抗凝，加等量的Hank’s液并混匀。

　　2、将分层液加入试管中，用量约为血量的1/2。用吸管沿管壁缓缓将血加入分层液面上。

　　3、置于水平离心机离心，1500r/min，10min。可见绝大多数单个核细胞悬浮于血浆和分层液的界面，呈白膜状。

　　4、用尖吸管吸取界面的细胞层，置于另一试管中，加入适量的Hank's液，混匀后以1000r/min，离心10min，弃上清。

　　5、同法洗涤细胞2次。

　　6、将细胞重悬于RPMI-1640培养液中，4℃保存备用。

　　四、注意事项

　　1、在分离外周血单个核细胞过程中，将稀释血液加于分层液上时，要避免冲散分层液面，而要使之形成良好的界面，否则影响分离结果。

　　2、此法操作得当，单个核细胞得率可达80%-90%，影响得率最重要的因素是分层液的比重。