1.根据离心前细胞计数的结果,先用少量神经元维持培养基重悬细胞,充分重悬后,补加液体至合适体积,按照(2-4)x104/cm2的密度在培养板、玻片等介质上接种细胞,并置于37℃孵箱培养。
2.培养过程中接触细胞要注意动作轻柔,接种Id后应避免把细胞从孵箱中拿出,可根据培养液的颜色和亮度观察污染情况(污染的细胞,培养液混浊、发黄;正常应该是清亮透明的)。3d后1/3量换液,并可利用神经元标志物的免疫化学染色鉴定纯度。第5天起每隔2d 1/2量换液,并可以根据神经元的成熟程度用于实验。
3.如果觉得神经元纯度达不到实验的要求,可以添加阿糖胞苷(终浓度为5µM),作用2d后,1/2量换液,逐渐去除。
培养成功的神经元,无污染,相差显微镜下细胞折光性好,细胞碎片很少或没有,突起长,培养基清亮,细胞有一定的间距,没有成团存在,分布均匀,而且没有太多的杂细胞。培养不太好的细胞,杂细胞多,神经元状态一般或很差,细胞碎片较多 展开 |