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高效液相色谱分析法的类型

2020.1.04

高效液相色谱分析法的类型:

1.正相分配色谱

正相分配色谱适用于不溶于水溶于有机溶剂中具有极性基团的样品,而正相分配色谱不适用于离子物质..

2.反相分配色谱

该方法广泛应用于反相分配色谱。样品的非极性部分起着保留作用。

在流动相中加入不同量的甲醇或乙腈可以调节分离,但如果样品含有离子基团,则需要在流动相中加入盐或调节流动相的PH值。例如,当样品中含有α-COOH基团时,流动相的PH值是酸性的,并通过抑制-COOH基团的电离来增强保留。这种方法叫做离子抑制法。如果样品具有强的离子基,有时采用在流动相中加入适当的反离子形成离子对的离子对方法。

在调整PH值时,应将PH值保持在包装手册规定的范围内。大多数化学键合二氧化硅用于PH=2-9然而,当加入盐时,使其PH=7.5-8或更小,多孔聚合物填料可广泛应用于PH中。该方法利用填料固定相离子交换基团与样品离子基团之间的离子交换作用分离样品组分。根据交换离子的不同,可分为阳离子交换和阴离子交换。

离子交换色谱法用于可溶于水中的离子物质在离子交换色谱中,流动相的盐浓度、ph值和盐的种类对保留值有很大的影响磷酸盐、乙酸盐和硼酸盐用于高效液相色谱中的离子交换。因为氯化物会腐蚀不锈钢仪器,所以不能在高效液相色谱中使用氯化钠或其他氯盐。有些盐不能根据测量波长使用。例如,乙酸的吸收波长约为210 nm。当检测处于短波端时,不宜以乙酸为流动相。凝胶色谱法不同于上述三种方法。用凝胶色谱法根据分子大小分离样品组分。这种方法也称为排阻色谱法或粒径排阻色谱法具有一定孔径的多孔合成聚合物经常用作填料。

因为在样品中,小分子深入微孔,所以流出晚,而大分子不进入微孔,所以流出快。通常,有机溶剂被用作分离合成树脂的流动相,其被称为凝胶渗透色谱法。

凝胶色谱样品的性质可分为凝胶渗透和凝胶过滤。

1.凝胶渗透色谱

凝胶渗透色谱法,简称GPC。这种色谱法用于pvc、ps、abs等有机溶剂样品,所用的洗脱剂为四氢呋喃、氯仿等。

2.凝胶过滤色谱

凝胶过滤色谱(凝胶过滤色谱),简称GFC这种色谱法用于蛋白质、淀粉、水性合成聚合物等水溶剂的试剂,所用溶液为水、缓冲液等。

凝胶有多种,根据其原料来源可分为有机胶和无机胶粘剂按其制备方法可分为均匀、半均匀和非均匀三种凝胶根据凝胶的强度,可分为三类:软胶、半硬质橡胶和硬胶。根据其适用性,溶剂可分为亲水性、亲脂性和两性凝胶。


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