噬菌体文库的扩增实验
实验材料 噬菌体
试剂、试剂盒 MgSO4麦芽糖琼脂糖氯仿DMSOSM
仪器、耗材 离心机分光光度计水浴锅
实验步骤
1. 制备铺平板菌
（1）2.5 ml 新鲜过夜培养的宿主菌液接种于250 ml 含0.2%麦芽糖和10 mmol/l MgSO4的LB培养液中。
（2）在37℃恒温摇床剧烈摇荡2~4 h，培养液中菌悬液浓度OD600达到0.5左右。
2. 将装有文库的微量离心管在离心机上稍加离心，以便与氯仿分开。
3. 将已包装和滴定的噬菌体水相（不含氯仿）加于铺平板菌中，37℃温育15 min。
4. 加0.5 ml 噬菌体/宿主菌混合液到8 ml 47℃保温的顶层琼脂糖中，混匀后迅速倒在新鲜的37℃保温的150 mm 的H平极上。
5. 轻轻转动平板待顶层琼脂糖铺匀后再放置5 min 使其凝固，倒扣平板于37℃培养6~7 h 。
6. 从恒温培养箱中取出所有转染的平板，分别在每一个平板中加入10 ml SM悬浮培养基，于4℃放置2~16 h。
7. 洗脱噬菌体，然后从所有平板中收集SM并合并到一个玻璃瓶或聚丙烯塑料管中。
8. 以2 800 g 离心5 min，将上清转移到新的带Teflon盖的玻璃试管中，再加入0.5 ml 氯仿，混匀，滴定已扩增的文库。
其他
用于扩增λ载体文库的对应大肠杆菌宿主菌株
推荐
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