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血清尿素的注意事项

2022.6.09

  1、二乙酰-肟法:

  (1)尿素不能直接与二乙酰-肟反应,加入二乙酰-肟和强酸的目的是生成能与之反应二乙酰。加入Fe3+ (或Cd2+)是为消除反应过程中生成的羟胺的干扰,硫氨脲可使反应的敏感度提高20倍。以前许多书刊介绍的方法是将二乙酰-肟与硫氨脲配在一起。但两者可生成针状黄色物质,用硫氨脲配在酸试剂中克服了这一缺点。

  (2)酸浓度与吸光度呈正相关,故酸浓度要准确。所用试管口径,放入沸水中的倾斜角度要尽量一致,水液面要在试管内液面之上,煮沸时间以放入试管重新沸腾计。最好每次测定标准和质控。观察尿素动态变化时,应嘱患者恒定食入蛋白,并空腹采血。样本不能立即分析时,可提取血清(或血浆)于密封样杯中,置4℃存放可稳定7天。结果大于20mmol/L时,样本改为10μl,结果乘以2。

  (3)此法虽然加入硫氨脲和镉离子,在一定程度上增进了显色强度和色泽稳定性,但仍有褪色现象(每小时约5%),所以,煮沸加热显色冷却后,应及时比色。

  (4)所用20μl加样器务必校正无误后方可使用。

  (5)血浆(清)中尿酸、肌酐、氨基酸等含氮物对本试验无干扰,溶血可能结果偏高,黄疸可能结果偏低。

  (6)血浆(清)尿素含量与进食的蛋白质含量有密切的关系。在高蛋白饮食时,血浆(清)中的尿素含量可明显升高,而低蛋白饮食时,则含量显著降低。

  2、酶偶联速率法:

  (1)该法最常出现的问题是试剂失效或反应系统被污染。试剂中最不稳定的是NADH和谷氨酸脱氢酶。在分析过程中应注意以下几个方面:如用血浆则不能用含氟化合物或NH4+的抗凝剂,前者可抑制尿素酶活性,后者则可参与反应。

  (2)试剂空白吸光度应大于1.2A,否则说明NADH被氧化。同种试剂、仪器,在分析条件不变的情况下,测定得F值应相对恒定,否则说明试剂失效。

  (3)复溶试剂勿振动,以免酶变性失活。必须用无氨水复溶试剂。试剂杯、样品杯、反应杯要无氨、洁净、无酸碱污染,应每次定标,并跟测质控血清。

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