全血C-反应蛋白(B-CRP)免疫比浊定量
1. 实验原理
QuikRead CRP是一个用抗人CRP包被的微粒进行免疫比浊测定CRP的仪器。样本中的CRP和微粒进行反应,反应生成物改变了溶液的浊度,通过QuikRead仪器进行测定。
全血加到缓冲液中,血细胞被溶解掉。测定也用这一个比浊管进行。试剂被预先定标,每批特定的定标标准曲线已存入在试剂盒提供的磁卡当中。
QuikRead CRP结果和免疫浊度法测定的结果相关性良好。
2. 标本采集
2.1 标本采集前病人准备:无需特殊准备
2.2 标本种类:末梢血、血清或血浆
2.3 标本要求:QuikRead CRP试剂盒直接用全血进行检测。肝素/EDTA血浆或者血清标本也能够进行测定,按照下面的步骤进行测定,应注意样品量的区别:
1)
吸取12μl的血浆血清标本。最后结果显示在屏幕上。
2) 吸取20μl的样品,最后结果乘以0.6。测定范围在5-100mg/l,超过范围必须进行稀释。
3. 标本储存:室温下放置,30分钟完成实验。
4. 标本运输:室温运输
5. 标本拒收标准:细菌污染
6. 试剂
6.1 试剂名称:QuikRead CRP 试剂
6.2 试剂生产厂家:Orion coporation Orion Diagnostica
6.3 包装规格:50Test/kit
6.4 试剂盒组成:
QuikRead CRP试剂盒组成: Cat.No.68789
CRP试剂帽 2X25
缓冲液 120ml
比浊管 50
磁卡 1
操作说明书 1
质控液另外提供:QuikRead CRP质控液 Cat.No.68296
6.5 试剂储存条件及有效期:所有试剂2-25℃可保存到试剂盒上所标的失效期。
7. 仪器设备
7.1
仪器名称:QuikRead 分析仪
7.2 仪器厂家:基恩科技有限公司
7.3 仪器型号:QuikRead 型
7.4 仪器通道选择:采取两个发光二极管:654μm,950μm;吸收范围:0.0-2.5
7.5 仪器校准程序:每个试剂盒有一个已知的校正数据,它记录在磁卡上,用以确定分析曲线,让磁卡通过仪器上读卡器,该数据信息就能送入QuikRead仪器之中,然后仪器就处于等待使用状态。
8. 操作步骤
8.1 Read the card (阅读磁卡):将磁卡在仪器的阅读槽中刷过,磁卡的磁带面向自己。
8.2 Ready for use CRP (准备进行CRP测定)
8.3 Measuring blank
8.3.1 使用QuikRead分液器加1ml缓冲液到比浊管中。
8.3.2 用毛细吸管加20μl不稀释的全血到比浊管中。(参照注意事项)
8.3.3 将CRP试剂帽盖于比浊管上拧紧。轻轻混匀(不能颠倒)。溶液变成亮红色。
8.3.4 把比浊管插入到仪器的检测孔中
8.4 Blank measure(测定空白):仪器测定样品空白。这需要40秒时间。在检测孔中读空白期间不要触摸比浊管。
8.5 Add reagent(加试剂)
8.5.1 按下试剂帽的内侧部分(例如,可以用手指或者一支笔来按)。如此将使CRP干粉试剂加到比浊管中。
8.5.2 从检测孔中拿出比浊管,快速地颠倒混匀。比浊管的溶液变成不透明的红色。
8.6 Shake the cuvette(混匀试管):屏幕显示……告诉你需要多长时间来混匀比浊管
6秒时间)。移动的一串点表示混匀的速度。
8.7 Insert the cuvette for measurement (插入比浊管进行测定):混匀结束后仪器发出三次短暂的嘟嘟声,立即放置比浊管于仪器的检测孔中。假如比浊管没有放置检测孔中,三秒钟后试验将作废。
注意1:不要触摸比浊管下部的光洁部分(光学测定部分)
注意2:假如比浊管没有在规定的时间内放置于检测孔中仪器将显示信息“cuvette inserted too late(比浊管插入太晚)”
8.8 Measuring120s (测定120s):仪器在2分钟内测定出CRP的浓度。结果显示在屏幕上,单位是mg/l.在实验完成之前屏幕上显示实验所需的剩余时间。
注意1:在结果没有出来并记录下来之前,不要将比浊管从测定孔中拿出来。如果拿出来的话会立刻中断测定。
注意2:检查试剂帽的底部塑料物是否脱落在比浊管的下部。如果在比浊管的下部存在试剂帽的底部塑料物,这可能干扰检测过程。
9. 结果判断与分析:QuikRead 在8-160mg/l之间直接从仪器屏幕给出数字值。
10. 质量控制:定期使用CRP 质控液(Cat.No.68296)。质控液的用量和全血的用量一样定为20μl。QuikRead CRP质控液的瓶子上标有CRP的靶值。
11. 计算:
直接读取屏幕上显示的数字结果即可。
12. 参考值范围<10mg/l
13. 临床意义
13.1 CRP<10mg/l比CRP升高更有意义。如果病程大于6-12小时且不是新生儿CRP<10mg/l可基本排除细菌感染。CRP为10-99mg/l,提示为局灶性细菌感染或菌血症。
13.2 动态反映病情(发病6-12小时即成倍增加);鉴别细菌还是病毒感染(细菌感染明显升高);经常的和定量的CRP测定有助于很多临床疾病的病程监测,并且能对细菌性脑膜炎,败血症,肺炎的诊断提供有价值的信息。在尿路感染方面,CRP据称是鉴别诊断肾盂肾炎和膀胱炎最可靠的指标。CRP也可用于评价急性心肌梗塞病人的梗塞范围。
13.3评价抗生素的疗效(治疗有效CRP明显下降)。
14. 操作性能
14.1快速简便、特异性强、灵敏度高、重复性好。
14.2 方法可靠,可清除自身溶血和空白的影响。
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