谷氨酸脱氢酶的测定
实验方法原理
L-谷氨酸:NAD(P)氧化还原酶(脱氨)。
L-谷氨酸+NAD(P)++H2O ⇌ 2-酮戊二酸+NAD(P)H+NH4+
实验适用于逆反应,ADP 刺激反应进行。:
实验材料 酶样品
试剂、试剂盒 咪唑缓冲液酮戊二酸乙酸铵NADHEDTAADP
仪器、耗材 分光光度计
实验步骤
实验所需「试剂」具体见「其他」
0.098 ml 实验混合物
0.02 ml LDH 稀释溶液
25℃ 时,于 340 nm 处吸收值降低。NADPH的吸收系数 ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。
注意事项
其他
试剂:
0.1 mol/L 咪唑缓冲液,pH7.9(咪唑,Mr=68.1;稀释 0.68 g 于 80 ml H2O,用 1 mol/L HCl 调节至 pH7.9)
0.2 mol/L 酮戊二酸(2-酮戊二酸,一钠盐,Mr=168.1,336 mg 溶于 10 ml 水中)
10 mol/L 乙酸铵(Mr=77.1;0.77 g 溶于 10 ml 水中)
0.01 mol/L NADH(二钠盐,Mr=709.4;71 mg 溶于 10 ml 水中)
0.1 mol/L EDTA(Mr=292.2;292 mg 溶于 10 ml 水中)
0.1 mol/L ADP(二钠盐,Mr=471.2;471 mg 溶于 10 ml 水中)
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