双向凝胶电泳技术的样品要求和制备的介绍
样品要求
1、建议使用的蛋白质溶解体系为8M尿素/4%CHAPS /40mMTris(Base)/65mM DTT;
2、样品浓度大于2 μg/ μl;
样品制备
双向电泳成功的关键在于建立一套有效的、可重复的样品制备方法。样品制备的影响因素包括蛋白质的溶解性、分子量、电荷数及等电点等。对于不同的样品性质及研究目的,其方法也不尽相同。不同的样品性质, 用于样品处理的缓冲液必须在低离子强度的基础上,既能保持蛋白质的天然电荷。又能维持其溶解性。因此,绝大多数样品往往都需要通过多次实验才能摸索到最适宜的条件。
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