(一) 光度准确度的测试材料
   美国NBS 规定测试材料可以是固体标准滤光片, 如930、203 标准片等,也可以是化合物标准溶液, 如铬酸钾、重铬酸钾溶液等, 用户可以任意选择。我国的国家标准也与NBS 相类似。各个国家的标准中, 都各自讲明了固体和液体两者的优缺点。作者认为固体标准滤光片比标准溶液好, 理由如下:
    ① 固体标准滤光片操作简单, 携带方便。
    ② 固体标准滤光片可以用空气作参照, 避免了寻找理想参照片基的麻烦。
    ③ 固体标准滤光片可以得到多个所需要的、较理想的峰或谷。如安徽省计量测试研究所研制的BW2018 标准片, 可以有两个峰一个谷, 且分布均匀(270 nm、293nm、350 nm)。
    ④ 固体标准滤光片的标准片基本身可以吸收一部分杂散光, 在吸收( 或透射) 峰的强度很小( 或很大) 时, 可以提高光度准确度的测量准确度。

(二) 光度准确度与光谱带宽的关系
    光谱带宽是紫外分光光度计分析误差的主要来源之一。一般来讲, 目前国内外的紫外分光光度计的仪器研究者或制造者, 在给出AA 或TA 时, 都不讲明在什么光谱带宽( SBW) 条件下测量, 这是不对的。
    A. Owen 在1988 年指出: “吸光度测量的准确度, 取决于仪器的SBW 与试样的自然带宽( NBW) 的比率。” ( 自然带宽被定义为最大吸收值的1/ 2 处的吸收谱带宽度)。Knowles 和A. Owen 在大量实验的基础上指出: SBW/NBW≤0. 1 时, 吸光度准确度可高达99. 5% ; 如果SBW/ NBW 增大, 则吸光度测量误差会增加。A. Owen 还指出, NBW≥20 时, 2nm 的SBW 对于吸光度的准确测定是足够的, 可满足大约99% 的日常分析。这也是我国药典规定用于药检的紫外可见分光光度计的SBW 一定要求≤2nm 的主要原因。
测量光度准确度时, 必须注意SBW 的选择。具体理由是:
    ① SBW 小, 则对应的狭缝宽度小, 此时的杂散光也小, 可提高吸光度测量的准确度。
    ② SBW 小, 对同一自然带宽( NBW) 来讲, 波长准确度会高。因为不同的波长有不同的摩尔吸光系数, 所以, 波长准确度高时, Beer 定律的偏离也会小, 即光度准确度测试误差小。
    ③ SBW 小, 则对应的狭缝窄, 但单色光的单色性也好, 更能接近单色光, 也可减少Beer 定律的偏离, 提高测量精度。但必须注意, SBW 不能太小, 否则信号弱, 仪器的信噪比小, 灵敏度差。
   狭缝宽度是指紫外可见分光光度计狭缝的机械宽度。一般来讲, 紫外可见分光光度计的制造者不会告诉用户仪器的狭缝宽度, 在某种程度上讲, 仪器的狭缝宽度是一个保密数据。但制造商应该或必须告诉用户仪器的光谱带宽与狭缝宽度的关系为

    式( 4-13) 中, f 为焦距; m 为光谱级数; d 为光栅常数; q 为衍射角( 有些人用b 表示衍射角)。
    所以, SBW 与单色器物镜的焦距f 有关, 而狭缝宽度与单色器物镜的焦距f 无关。
    必须指出, 光谱带宽以nm 计, 而狭缝宽度以mm 计, 二者在计量单位上相差100 万倍。所以, 那些称紫外可见分光光度计仪器的狭缝宽度为多少纳米是不对的。

(三) 光度准确度与波长重复性的关系
    在紫外可见分光光度计中, 波长重复性对光度准确度的影响是很大的。在紫外可见分光光度计中的使用过程中, 如选择试样的最大吸收峰作为测试波长, 则在重新设定该波长时, 产生的微小波长差对光度准确度测量的结果影响不大。但如果不是选择被测试样的最大吸收波长作为测试波长, 而是选择最大吸收波长两侧的波长λ侧作为测试波长( 见图4-3 ) , 则同样大小的波长误差会产生很大的光度准确度测量误差。
    由图4-3 可知, Δλ1 = Δλ2 , 但ΔA1 n ΔA2 。因此, 在要求高精度测量时,为了得到更好的光度准确度, 一定要注意选用波长重复性好的紫外可见分光光度计仪器。并且, 在分析过程中, 特别要注意选择试样的最大吸收峰处的波长作为测试波长, 否则难以得到令人满意的结果。

(四) 光度准确度与波长准确度的关系
    紫外可见分光光度计的波长准确度是很重要的; 特别在比较仪器时, 波长准确度显得更加重要。因为物质对不同波长的光吸收时, 有不同的摩尔吸光系数。摩尔吸光系数不同, 分析测试的灵敏度就不同。所以, 同一台紫外可见分光光度计, 对同一试样, 不同波长测试, 其结果不一样。同样, 两台波长准确度不同的紫外可见分光光度计, 对同一试样, 在同一波长上测试, 其结果也会不同。所以, 波长准确度在某种程度上讲, 决定光度准确度。