紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量
紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量
【摘要】本实验利用紫外分光光度法测定由维生素C和维生素E组成的混合物中各组分的浓度。在这两种组分组成的混合物中，彼此都不影响另一种物质的光吸收性质，根据相互间光谱的重叠的程度采用相对的方法进行定量测定。
【关键词】紫外分光光度法；维生素C；维生素E；浓度
1、引言
维生素C（抗坏血酸）和维生素E(α-生育酚)在食品中能起抗氧化剂作用，即它们在一定时间内防止油脂变性。两者结合在一起比单独使用的效果更佳，因为它们在抗氧化性能方面是“协同的”。因此，它们作为一种有用的组合试剂用于各种食品中。维生素C是水溶性的，维生素E是酯溶性的，它们都能溶于无水乙醇，因此能在同一溶液中，能够利用紫外可见分光光度法测定双组分相同的原理，在紫外光区测定它们。
2、实验原理
根据朗伯—比尔定律，用紫外—可见分光光度法很容易定量测定在此光谱区内有吸收的单一成分。由两种组分组成的混合物中，若彼此都不影响另一种物质的光吸收性质，可根据相互间光谱重叠的程度，采用相对的方法来进行定量测定。例如，当两组分吸收峰部分重叠时，选择适当的波长，仍可按测定单一组分的方法处理；但当两组分吸收峰大部分重叠时，则宜采用解联立方程组或双波长法等方法进行测定。
一般来说，为了提高检测的灵敏度，λ1和λ2宜分别选择在A、B两组分最大吸收峰处或其附近。
3、紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量
3.1、仪器试剂
仪器：紫外-可见分光光度计（天津港东UV-4501S），石英吸收池一对
试剂：维生素C（抗坏血酸），维生素E(α-生育酚)，无水乙醇
3.2、实验步骤
3.2.1、 检查仪器
开机预热20min，并调试至正常工作状态。
3.2.2、 配制系列标准溶液
（1）配制维生素C系列标准溶液：称取0.0132g维生素C，溶于无水乙醇中，定量转移入1000 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。此溶液浓度为7.50×10-5mol/L。分别吸取上述溶液4.00 mL，6.00 mL，8.00 mL，10.00 mL于4只洁净干燥的50 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。
（2）配制维生素E系列标准溶液：称取维生素E0.0488g，溶于无水乙醇中，定量转移入1000 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。此溶液浓度为1.13×10-5mol/L. 分别吸取上述溶液4.00 mL，6.00 mL，8.00 mL，10.00 mL于4只洁净干燥的50mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。
3.2.3、 绘制吸收光谱曲线
3.2.6、 结束工作
（1）实验完毕，关闭电源。取出吸收池，清洗晾干后入盒保存。
（2）清理工作台，罩上仪器防尘罩，填写仪器使用记录。
4、实验数据处理
5、结果分析与讨论
在本实验中，要用石英比色皿而不能用玻璃比色皿，这是因为一般紫外光区用石英比色皿,可见光区用玻璃比色皿。石英比色皿可用在全波段,玻璃比色皿只能用于340nm以上波长,因为玻璃不透紫外光。本实验中所用的参比溶液为乙醇，参比溶液又叫空白溶液，测量时用作比较的、不含被测物质但其基体尽可能与试样溶液相似的溶液，主要是用作空白调零，即直接从仪器上减去空白试验产生的干扰值。因此本实验中根据维生素C、E的溶解性质，需要用乙醇作为本次实验的参比溶液而不是水。
紫外可见光度法测定参数是吸光度A，该值与入射光强度和透射光比值有关，入射光增大，透射光也增大，增大检测器的放大倍数，也影响入射光和透射光的检测，而且除待测物之外，其它物质也可能对入射光产生吸收，因此限制了灵敏度。对于低浓度的待测液该方法的可信度也较低，假如一种待测物质含量很低的样品用紫外可见法分析，如果透过率为T＝99/100，则吸光度A＝log100/99＝0.004，这个吸光值很低，几乎与噪声相近，可信度下降，几乎无法确定。
