流式细胞仪检测细胞因子的分泌和分离分泌细胞因子细胞

基本方案细胞因子分泌实验

材 料

冰冷的或 37°C 预温的培养液。例如，培养人细胞用含 1 0 % 人 A B 血浆或自身血清的 1640 完全培养液。培养小鼠细胞用含 1 0 % 小鼠血清的 R P M 1-1640 完全培养基

抗原， 1〜10ug/m l 肽 或 1〜100ug/m l 蛋白质

合适的对照抗原

金黄色葡萄球菌肠毒素（S E B ， Sigma)

P B S ， p H 7. 2 , 含 0.5% (m /V ) B S A 和 2 mmo l /L E D T A ，冰上预冷

细胞因子捕获试剂：一抗，包含抗细胞表面抗原的抗体（如 C D 4 5 ) 和抗细胞因子抗 体（Miltenyi Biotec 公司）

重组的细胞因子

细胞因子检测抗体（Miltenyi Biotec 公司）： P E 、 A P C (allophycocyanin) 或 FITC标记的抗细胞因子单抗

荧光素标记的抗体：抗 人 或 小 鼠 C D 4-F I T C ，抗 人 C D M -PerCP，抗 小 鼠 C D 45R /B 220- PerCP 等

抗 P E 磁 珠（Miltenyi Biotec 公司）

9 6 孔 或 2 4 孔培养板或 6c m 培养皿

细胞刮或类似工具

1.5〜15 ml V 形底管或深孔培养板

慢速旋转培养器

1 . 制备 人 P B M C (单元 8 . 1 ) 或小鼠脾脏/淋 巴 结 细 胞（单 元 2.1)。计数细胞和测定细胞 活 性

在 细 胞 分 离 、刺 激 和 冻 存 时 不 要 使 用 任 何 非 人（人 细 胞） 或 非 小 鼠（小 鼠 细 胞 ）

备 选 方 案 I PBMC 分泌细胞因子的快速检测

1 . 制 备 和 洗 涤 细 胞（见基本方案，步 骤 1 和 2)。 用培养液悬浮细胞 ： I X l O⁷ 个细胞/m l

2 . 每个 1.5 ml V 形底管或深孔培养板中加入IOOul含IX IO⁶ 个细胞的细胞悬液。标记为 A

3 . 按基本方案步骤 4 加入抗原和赙育细胞

备 选 方 案 2 全血细胞分泌细胞因子的快速检测

附 加 材 料