ELISA法与PCR法检测乙型肝炎病毒标志物的实验研究

［摘  要］ 目的：探讨ELISA法和PCR法联合检测对乙型肝炎诊断的临床价值。方法：采用ELISA法与PCR法同时检测421份血清标本。结果：用ELISA法测定HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗HBc(+)时，HBVDNA阳性率高达90.6％；用ELISA法测定HBsAg(+)、抗HBe(+)、抗HBc(+),HBVDNA阳性率为29.8％。结论：两种方法联合检测对临床有不同的指导意义。

　　［关键词］ 乙型肝炎；ELISA；荧光定量PCR；乙肝5项
    
　　乙型肝炎是世界上最常见的传染病之一，每年死于该病的有100多万人［1］。乙肝病毒(HBV)携带者约占正常人群的10％～15％，HBV携带者主要依靠血清标志物乙肝5项(即HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc)来检查发现，但由于检查方法的多样性，有时会出现漏检和误检。随着科学技术的不断发展，除传统的ELISA法，目前我们用的较多的是荧光定量PCR法，PCR法测出结果反映的是体内病毒DNA拷贝数，具有高度的灵敏性和特异性，所以近年来正广泛应用于HBV感染的研究和诊断。本文就这两种方法对HBV检测结果进行分析，以探讨传统的ELISA法与PCR法相结合对乙肝的诊断治疗和预后评估的价值。

　　1  材料与方法

　　1.1  标本  2005年7月至2006年7月门诊和住院患者同时检测乙肝5项和HBVDNA的421例患者。

　　1.2  仪器和试剂  酶免分析仪是芬兰生产的MULTISKAN MK3，试剂为上海荣盛生物技术有限公司生产；PCR仪为杭州大和公司生产的Linegene型自动荧光分析仪，试剂为配套试剂。

　　1.3  方法  收集ELISA法检测乙肝5项标本421份，其中大三阳即HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗HBc(+)标本169份，小三阳即HBsAg(+)、抗HBe(+)、抗HBc(+)标本252份，再分别用PCR法检测，对其结果进行χ2检验分析处理。

　　2  结果

　　两种不同的方法检测结果比较，见表1。

　　表1  两种不同的方法检测结果　略

　　从统计结果看,ELISA法的检测结果与PCR法显示的结果不同，说明两种方法本身有不同的临床意义。

　　3  讨论

　　用ELISA法检测HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗HBc(+)169例中HBVDNA有153例阳性，其阳性符合率为90.5％，提示病毒的感染和复制；HBsAg(+)、抗HBe(+)、抗HBc(+)252例中HBVDNA有75例阳性，其阳性符合率为29.8％，这说明HBeAg(+)转换为抗HBe(+)就标志着病毒复制终止是具有一定局限性的。张复春［1］等用定量PCR技术检测慢性乙肝患者血清HBVDNA含量表明，抗HBe的出现并不能表示HBV复制的停止，而只是复制水平的降低。HBV复制时，HBVDNA可出现于肝细胞和血清中，单从HBVDNA的检测难以判定HBV是否在体内复制，而且仅以ELISA法判定HBV感染及传染性、治疗效果的指标具有一定的局限性，目前认为HBVDNA是乙肝传染性的特异性标志，故ELISA法与PCR法的联合检测对乙肝的诊断更具有临床价值。就这两种方法而言，ELISA法成本低，不需要特殊设备，易开展，但存在一定的假阳性，与标本的前期处理、黄疸和溶血有关，对乙肝的诊断可能有漏诊；PCR技术是临床基因诊断的新方法，采用封闭扩增实时荧光定量检测结果，特异性强、灵敏度高，阳性结果不但表明HBV的感染，还能反映病毒复制情况，是对乙肝5项指标的补充，PCR技术的应用，开辟了乙肝治疗检测的新途径［2］，故ELISA法与PCR法联合检测对乙肝的诊断、治疗及预后更具有临床价值。

　　参考文献：

　　［1］  张复春，吴婉芬，董惠卿，等．定量聚合酶链反应检测血清中HBVDNA及其临床应用［J］．中华传染病学杂志，1997,15(1)：24．

　　［2］  骆抗先，张智，杨洁，等．聚合酶链反应检测HBVDNA及其临床意义［J］.中华传染病学杂志，1994,12(4)：189．