避暗和跳台实验相关：西归对小鼠学习记忆功能的影响
摘要：目的研究西归对小鼠学习记忆功能的影响。方法采用跳台法、避暗法观察西归对东莨菪碱、亚硝酸钠、乙醇所致小鼠学习记忆功能障碍的影响。结果与模型组及溶剂组比较，西归能明显延长东莨菪碱、亚硝酸钠、乙醇所致学习记忆障碍小鼠的潜伏期（户＜０.０５或户＜０.０１），并能降低错误次数（户＜０.０５或／＞＜０.０１）。结论西归具有改善小鼠学习记忆障碍作用。
关键词：西归；小鼠；学习记忆
西归为伞形科属植物西藏凹乳芹（设／Ａ／ＭＷｅＢｏｂｓ．）的根，又称独脚当归，其主要分布在中国的西部。在民间已有百余年的使用历史，云南大理有人工栽培，当地人用其作为滋补蔬菜食用，鲜品也可生吃，风味独特。西归气芳香，味甘、微苦；具有补血、补气、调经等功效现代药理学研究表明，西归具有抗疲劳、抗缺氧、抗氧化等作用。但关于西归对学习记忆功能障碍的研究，目前尚未有报道。本文将通过研究西归对多种化学药物所致学习记忆障碍的影响，为下一步开发研究西归奠定理论基础。
１材料与仪器
１．１材料
西归，购于云南省大理州鹤庆县马厂乡，经大理学院药学院生药教研室马晓匡教授鉴定为伞形科植物西藏凹乳芹的根；人参皂苷（ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ， ＧＳ ），惠州市东方植物保健科技有限公司，批号：２００７０５１６；羧甲基纤维素钠（ＣＭＣ－Ｎａ），淮南山河药用辅料有限公司，批号０３０６０３； ９５％乙醇，购于大理博源化工；无水乙醇，天津市化学试剂一厂，批号：０６０８２４；氢溴酸东莨菪碱，上海禾丰制药有限公司，批号：２００５０５１８；亚硝酸钠，重庆化学试剂总厂，批号：９７０９２３。
１．２仪器
ＲＥ５２－０５旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；XR-3TB跳台测试系统，上海欣软信息科技有限公司；XR-XB110避暗系统，上海欣软信息科技有限公司。
２动物
ＫＭ种小鼠，雌雄各半，体重１８￣２２ｇ，由四川省科学院省人民医院实验动物研究所提供，许可证号：ＳＣＸＫ（川）２００４－１５。
３方法
３．１西归的提取及溶液的制备
３．１．１提取取干生药西归粗粉１０ ０００．００ｇ，用９５％乙醇回流４次，然后合并滤液，经减压浓缩，最终得浸裔１７９８．２６ｇ，提取效率为１７．９８％，即１ｇ浸膏相当于５．５６ｇ的生药。
３．１．２ １％ＣＭＣ－Ｎａ的制备取适量的ＣＭＣ－Ｎａ，用纯净水配制到所需浓度。
３．１．３西归溶液的制备１２１根据小鼠对西归的最大给药量为４０４．４ ｇ生药．ｋｇ＿、ｄ＿、西归高剂量、西归中剂量、西归低剂量分别为最大给药量的１／５、１／１０、１／２０，即给药剂量分别为８０．８８ ｇ.ｋｇ—１、４０．４４ ｇ.ｋｇ＇ ２０．２２ ｇ.ｋｇ—１。以０．２ ｍＬ.（１０ｇ广灌胃给药，应分别配制成７２．８％、３６．４％、１８．２％的西归溶液。
３．１．４ １％ ＧＳ制备以ＧＳ给药剂量２００ ｍｇ.ｋｇ＿１，给药体积０．２ ｍＬ.（ｌＯｇＴ１，即应配制１％的ＧＳ溶液。取１．００ ｇ的ＧＳ，用纯净水配制到所需浓度。
３．１５ １２％亚硝雜制备以亚硝麵给药剂量１２０ ｍｇ． ｋｇ＇给药容量０．１ ｍＬ＊ （１０ ｇ）＇即应配制１．２％的亚硝酸钠溶液。取１．２０ ｇ的亚硝酸钠，用纯净水配制到所需浓度。
３．１．６ ４０％乙醇制备取无水乙醇２０ ｍＬ，用纯净水稀释到所需浓度。
３．２西归对乙醇所致记忆再现陣碎的彩响
３．２．１跳台法取ＫＭ种小鼠８４只，雌雄各半，随机分成７组，分别为正常组、模型组、溶剂组、西归高剂量组、西归中剂量组、西归低剂量组及人参皂苷组，各组每天灌胃１次，连续给药６ ｄ，其中正常组、模型组分别给予等体积的生理盐水，溶剂组给予等体积的溶剂。于末次给药后１ ｈ，先让小鼠在跳台仪中适应３ ｍｉｎ，然后在电流0.4mA下训练５ ｍｉｎ。于训练后２４ ｈ （在测试前１ ｈ，再给１次药）。正常组给予等体积的生理盐水，其余各组均灌胃４０％乙醇０．１ ｍＬ ＿ （１０ ｇ）＇ ３０ ｍｉｎ后测试（开始测试时，将小鼠放在平台上），记录小鼠在５ｍｉｎ内的潜伏期及错误次数。
３．２＿２避暗法取ＫＭ种小鼠７７只，动物分组、给药时间、给药方法及给药剂量均同跳台法，于末次给药后１ ｈ，开始训练（先让小鼠适应环境３ ｍｉｎ，然后在0.4mA的电流下训练５ ｍｉｎ ）。于训练后２４ ｈ（在测试前１ ｈ，再给１次药），正常组给予等体积的生理盐水，其余各组灌胃４０％乙醇Ｏ．ｌｍＬ.（１０ ｇ）＇ ３０ｍｉｎ后测试（把动物放人明室，背朝洞口），记录小鼠在５ｍｉｎ内的潜伏期及错误次数。
３．３西归对东茛菪减所致记忆获得陣碎的影响
３．３．１跳台法取ＫＭ种小鼠８４只，雌雄各半，随机分成７组，分别为正常组、模型组、溶剂组、西归高剂量组、西归中剂量组、西归低剂量组及人参皂苷组，各组每天灌胃一次，连续给药６ ｄ，其中正常组、模型组分别给予等体积的生理盐水，溶剂组给予等体积的溶剂。于末次给药后４５ ｍｉｎ，西归各組及模型组小鼠腹腔注射２ ｍｇ.ｋｇ—１氢溴酸东莨菪碱，正常组腹腔注射等体积生理盐水，１５ ｍｉｎ后开始训练（先让小鼠在跳台仪中适应３ ｍｉｎ，然后在电流0.4mA下训练５ ｍｉｎ ）。２４ ｈ后开始测试（于测试前１ ｈ，再给１次药），开始测试时，把小鼠放在平台上，并记录小鼠在电流0.4mA下５ ｍｉｎ内的潜伏期及错误次数。
３．３．２避暗法取ＫＭ种小鼠７７只，动物分组、给药时间、给药方法及给药剂量均同跳台法，于末次给药后４５ ｍｉｎ，西归各组及模型组腹腔注射２ ｍｇ.ｋｇ－１氢溴酸东莨菪碱，正常组腹腔注射等体积生理盐水，１５ ｍｉｎ后开始训练（把小鼠放人避暗仪适应环境３ ｍｉｎ，然后在电流0.4mA下训练５ｍｉｎ ）。２４ ｈ后开始测试（于测试前１ ｈ，再给１次药），开始测试时，把动物放人明室，背朝洞口，并记录小鼠在电流0.4mA下５ｍｉｎ内的潜伏期及错误次数。
３．４西归对亚硝狻钠所致记忆巩固障碎的影响
３．４．１跳台法取ＫＭ种小鼠８４只，雌雄各半，随机分成７组，分别为正常组、模型组、溶剂组、西归高剂量组、西归中剂量组、西归低剂量组及人参阜苷组，各组每天灌冑１次，连续给药６ ｄ，其中正常组、模型组分别给予等体积的生理盐水，溶剂组给予等体积的溶剂。于末次给药后１ ｈ，开始训练（先让小鼠在跳台仪中适应３ ｍｉｎ，然后在电流0.4mA下训练５ｍｉｎ）。训练后，西归各组及模型组立即皮下注射１２０ ｍｇ.ｋｇ＿ｌ亚硝酸钠，正常组皮下注射等体积的生理盐水，２４ ｈ后开始测试（于测试前１ｈ，再给１次药），开始测试时，把小鼠放在平台上，并记录小鼠在电流0.4mA下５ ｍｉｎ内的潜伏期及错误次数。
３．４．２避暗法取ＫＭ种小鼠７７只，动物分组、给药时间、给药方法及给药剂量均同跳台法，于末次给药后１ ｈ，开始训练（把小鼠放入避暗仪适应环境３ ｍｉｎ，然后在电流0.4mA下训练５ｍｉｎ ）。训练后，给药组及模型组立即皮下注射１２０ ｍｇ.ｋｇ－１亚硝酸钠，正常组皮下注射等体积的生理盐水。２４ ｈ后开始测试（于测试前１ ｈ，再给１次药），开始测试时，把动物放人明室，背朝洞口，并记录小鼠在电流0.4mA下５ｍｉｎ内的潜伏期及错误次数。
３．５统计方法
采用ＳＰＳＳ １３．０软件包中方差分析ＬＳＤ法统计分析潜伏期，用Ｇａｍｅｓ－Ｈｏｗｅｌｌ法统计分析错误次数。
４讨论
学习记忆是构成大脑最高机能一智能的要素，在智能发展过程中起决定性作用。学习是指新行为（经验）的获得和发展，记忆则是通过学习获得经验的保持和再现。学习记忆是一个非常复杂的神经活动过程，它与脑内神经递质（主要是乙酰胆碱）、肾上腺素、５－羟色胺及氧等物质密切相关，而这些物质脑内缺乏可引起学习记忆获得、巩固及再现障碍。目前，由东莨菪碱、亚硝酸納和乙醇所致学习记忆获得、巩固及再现障碍是公认的学习记障碍工具药物。
近年来，西归的药理学研究表明，西归具有抗疲劳、抗缺氧的作用 。而抗疲劳、抗缺氧可促进学习记忆的作用因此，认为西归可能具有促进学习记忆的作用。通过跳台、避暗两种实验方法，研究西归对东莨菪碱、亚硝酸钠和乙醇所致小鼠学习记忆获得、巩固及再现障碍的影响。实验结果显示，西归能明显提高东茛菪碱、亚硝酸納、乙醇所致学习记忆障碍小鼠的潜伏期，并能降低错误次数，说明西归具有改善学习记忆的作用。其作用机制可能与促进了中枢胆碱能神经系统活动、抗脑缺血缺氧等有关。但学习记忆是一个复杂的生理过程，因此要具体的了解西归促进学习记忆作用机制，还有待于进—步研究。
