维生素C的测定
维生素C是一种已糖醛基酸，有抗坏血病的作用，所以被人们称做抗坏血酸，主要为还原型及脱氢型两种，广泛存在于植物组织中，新鲜的水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑橘等食品中含量较多。它是氧化还原酶之一，本身易被氧化，但在有些条件下又是一种抗氧化剂。
维生素C（还原型）纯品为白色无臭结晶，熔点190～192℃，溶于水或乙醇中，不溶于油剂。在水溶液中易被氧化，在碱性条件下易分解，在弱酸条件中较稳定，维生素C开始氧化为脱氢型抗坏血酸（有生理作用）。如果进一步水解则生成2，3-二酮古乐糖酸，失去生理作用。
根据它具有的还原性质可以测定维生素C的含量。常用的测定方法有
（1）2，6-二氯靛酚法 （还原型VC）
（2）2，4-二硝基苯肼法 （总VC）
（3）碘酸法
（4）碘量法
（5）荧光分光光度法
一、2，6-二氯靛酚滴定法
1、原理：
还原型抗坏血酸还原染料2，6-二氯靛酚，该染料在酸性中呈红色，被还原后红色消失。还原型
抗坏血酸还原2，6-二氯靛酚后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时，一定量的样
品提取液还原标准2，6-二氯靛酚的量与样品中所含维生素C的量成正比。
2、试剂
⑴ 1%草酸溶液：称取10g草酸，加水至1000ml；
⑵ 2%草酸溶液：称20g草酸，加水至1000ml；
⑶ 维生素C标准液：准确称20mgVC溶于1%草酸中，并稀释至100ml，吸5ml于50ml容量瓶中，加入1%草酸至刻度，此溶液每毫升含有0.02mgVC；
⑷ 0.02%2，6-二氯靛酚溶液：称取2，6-二氯靛酚50mg，溶于200ml含有52mg碳酸氢钠的热水中，冷却后，稀释至250ml，过滤于棕色瓶中，贮存于冰箱内，应用过程中每星期标定一次。
标定一：吸标液（VC）5ml于三角瓶→加6%KI溶液0.5ml→加1%淀粉3滴→用0.001N KIO3标液滴定到淡兰色。
计算：
抗坏血酸浓度（mg/ml）= （V1 × 0.088）/ V2
V1 -滴定时消耗0.001N KIO3标液的体积（ml）
V2 -维生素C重量（g）
0.088 -1ml0.001N KIO3标液≈维生素C的量（mg/ml）
标定二：吸5ml已知浓度V C标液 → 加5ml1%草酸 → 用染料2，6-二氯靛酚滴定至溶液呈粉红色，在15秒不褪色为终点
计算：每毫升2，6-二氯靛酚相当于维生素C的毫克数等于滴定度（T）
T= （C × V1）/ V2
C -维生素C的浓度（mg/ml）
V1 -维生素C的体积（ml）
V2 -消耗2，6-二氯靛酚的体积（ml）
⑸ 0.001N KIO3标液：吸0.1N KIO3溶液5ml→于500ml容量瓶内→加水至刻度，每毫升相当于VC0.008mg；
⑹ 0.5%淀粉溶液；
⑺ 6%KI溶液；
3、操作方法
⑴ 提取：称样50g→加2%草酸100ml→到入捣碎机中→处理→过滤→颜色若深可加白陶土
⑵ 滴定：吸5ml样液→于三角瓶→用染料滴定至粉红色→15秒内不褪色
计算：
VC（mg/100g）=（V × T）/ W × 100
V -消耗染料体积（ml）
T -1ml染料所能氧化维生素C的毫克数
W -滴定时所有滤液中含有样品的克数
4、注意事项
⑴ 所有试剂的配制最好都用重蒸馏水；
⑵ 滴定时，可同时吸二个样品。一个滴定，另一个作为观察颜色变化的参考；
⑶ 样品进入实验室后，应浸泡在已知量的2%草酸液中，以防氧化，损失维生素C；
⑷ 贮存过久的罐头食品，可能含有大量的低铁离子（Fe2+），要用8%的醋酸代替2%草酸。这时如用草酸，低铁离子可以还原2，6-二氯靛酚，使测定数字增高，使用醋酸可以避免这种情况的发生；
⑸ 整个操作过程中要迅速，避免还原型抗坏血酸被氧化；
⑹ 在处理各种样品时，如遇有泡沫产生，可加入数滴辛醇消除；
⑺ 测定样液时，需做空白对照，样液滴定体积扣除空白体积。
二、2，4-二硝基苯肼法
可测总抗坏血酸，总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸型。此法是将样品的还原型抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸，然后与2，4-二硝基苯肼作用，生成红色的脎。脎的量与总抗坏血酸含量成正比，将红色脎溶于硫酸后进行比色，由标准曲线计算样品中总VC。
1、原理：
用酸处理过的活性碳把还原型的抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸，在继续氧化为二酮古乐糖酸。
二酮古乐糖酸与2，4-二硝基苯肼偶联生成红色的脎，其成色的强度与二酮古乐糖酸浓度呈正
比，可以比色定量。
2、步骤
⑴ 样品处理与分析
称一定样 → 加等量2%草酸 → 于高速捣碎机捣碎 → 取匀浆20g → 用1%草酸定容100ml → 过滤 → 取滤液10ml → 加1%草酸10ml → 加少量活性炭 → 摇1分钟 → 静置过滤 → 各取滤液2ml于样品管和样品空白管 → 各管加入1滴硫脲溶液 → 于样品管中加入2，4-二硝基苯肼0.5ml → 分别于两个管加盖 → 于37℃保温箱3小时 → 取出后样品管放入冰水中 → 样品空白管取出后冷至室温 → 在样品空白管加入2，4-二硝基苯肼 → 0.5ml → 样品管和空白管都于冰浴中 → 滴加85%H2SO42ml于各管中 → 边滴边摇 → 防止温度升高炭化后呈黑色 → 冰浴中30分钟后取出 → 室温下放置30分钟后，在540nm测消光值，从标准曲线上查出相应的含量
⑵ 标准曲线的绘制
取5个50ml容量瓶编号 1 2 3 4 5
加VC标液0.2mg/ml 10 20 30 40 50ml
取5个比色管取相应 2 2 2 2 2
加硫脲溶液（滴） 1 1 1 1 1
2，4-二硝基苯肼（ml）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
于37℃保温箱3～4小时，取出于冰浴中，然后滴加85%硫酸2.5ml→取出放30分钟→在540nm下测各消光值绘标准曲线，同时做空白。
计算：每百克食品中抗坏血酸的毫克数=C/W *100
