苯酚-次氯酸盐分光光度法测定水中的氨氮
一、方法要点
氨与苯酚及次氯酸钠在碱性介质中，以亚硝酰铁氰化钠为催化剂，生成蓝色的靛酚。颜色的深度与氨浓度成比例，可用分光光度法测定。显色反应受pH值、温度及次氯酸盐浓度等因素影响较大。采用pH 11.7的磷酸盐缓冲溶液，在37℃发色30min，次氯酸盐浓度为50mg／L(指测定体系的浓度，以有效氯计)，在此条件下灵敏度最高。钙、镁及其他金属离子的干扰可用EDTA掩蔽消除。
二、试剂与仪器
(1)铵标准溶液：称取3．8190g在100℃干燥过的无水氯化铵，溶于水中，转入1L容量瓶中，稀释至标线，此溶液含氨氮为1mg／mL。再吸取10mL置于1000mL容量瓶中，用水稀释至标线，此溶液含氨氮为0．01mg／mL。
(2)溶液A：溶解5g苯酚和25mg亚硝酰铁氰化钠于水中，稀释至500mL，放入棕色瓶中贮存，并置于冰箱中。
(3)溶液B：溶解2．5g氢氧化钠、18．7g、磷酸氢二钠和15.9g磷酸钠(Na3PO4·12H2O)于水中，加入含有效氯250mg的次氯酸钠溶液，用水稀释，用磷酸或磷酸钠调节至pH11．7，然后用水稀释至500mL。
(4)EDTA溶液(1％)：溶解1gEDTA于100mL水中，用浓氢氧化钠溶液调节pH 10。
(5)次氯酸钠溶液：将浓盐酸滴加于二氧化锰上，使发生的氯气通入2mol／L氢氧化钠溶液中。可得有效氯浓度为0.3～0.4mol／L的溶液。或将5％～10％漂白粉溶液用浓盐酸调至pH 6．5～7制得，两种方法制得的次氯酸钠溶液均不稳定，使用前需用硫代硫酸钠间接碘量法测定其中的有效氯。用漂白粉溶液制备次氯酸钠时，会产生大量钙的沉淀，必须滤去。
(6)分光光度计。
(7)pH-S-3型酸度计。
三、分析步骤
量取处理后的水样或试液，置于100mL容量瓶中，加1mL 1％EDTA溶液(如样液含钙、镁较多时加3mL)，摇匀，加入10mL溶液A，加10mL溶液B，摇匀，用水稀释至标线，再摇匀。置于37℃恒温水浴中30min(或20～30℃室温下4h)，用1cm比色皿，于625nm波长处，以试剂空白为参比，测定吸光度。由标准曲线查得相应的氨氮含量。
计算：
氨氮(mg.N／L)=测得氨氮量（μg)/水样体积(mL)
四、标准曲线的绘制
在6个100mL容量瓶中，分别加入0.0、1．0、3．0、5.0、7.0、9.0μg氨氮，加少量水，各加1mL 1％EDTA溶液，以下按分析步骤操作。以吸光度对应氨氮的浓度绘制标准曲线。
五、注意事项
(1)次氯酸钠不稳定，用时应测定有效氯。测定方法：吸取次氯酸钠溶液10mL于100mL容量瓶中，加水稀至标线，混匀。吸取稀释液10mL置于250mL碘量瓶中，加水40mL碘化钾2g，混匀，加5mL6mol/L硫酸溶液，密塞混匀，置暗处5min后。用0.1mol/L硫代硫酸钠溶液滴定至淡黄色，加1mL淀粉溶液，继续滴至蓝色刚消失为止。
计算：有效氯(Cl2)=VN×(70.91/2000)×（100/10）×（100/10）％
式中V——滴定时消耗硫代硫酸钠溶液的体积，mL；
N——硫代硫酸钠溶液的浓度。
(2)溶液发色后，可稳定24h。
