分子荧光维生素B2含量的测定
维生素B2含量的测定
一、实验目的:
学习分子荧光产生的原理;利用荧光分光光度计绘制荧光激发与发射光谱图;学会判断谱图中各种峰的类型的方法。
二、实验原理:
分子吸收短波长(高能量)的光后,能量释放以光的形式出现,而发射较激发光波长更长的荧光。
三、实验内容:
1.维生素B2荧光激发光谱与发射光谱的绘制;
打开软件并打开Edit窗口,根据实验目的设置测定参数。
例如:绘制发射光谱,设定激发波长为377nm(或者454nm),发射波长范围400~700nm。 绘制激发光谱可设定发射波长为527nm,激发波长范围为200~500nm。
根据图形,确定激发光谱和发射光谱荧光峰的位置。
2.维生素B2系列标准溶液的配制;
分别取0.1000g/L标准溶液0.2 、0.4 、0.6 、0.8 、1.0ml定量转移至25ml容量瓶中,用去离子水稀释至25ml。
3.在选定激发波长(l1)下测量系列标准溶液的荧光发射光谱,测定在选定波长(l2)下的荧光强度并绘制标准工作曲线;
4.维生素B2片的处理:取维生素B2片(约0.065g)一片,用玻璃棒捣碎后定量转移至250ml容量瓶中,然后取5.00ml溶液稀释至25.00ml,在选定激发波长(l1)下测量待测溶液的荧光发射光谱,测定在选定波长下(l2)的荧光强度并计算维生素B2的浓度(g/L);
5.根据以上数据,求出维生素B2的含量(以百分比浓度表示x%)。
四、注意事项:
1.绘制标准工作曲线与待测溶液所选定的波长l1/l2应一致;
2.能正确识别荧光光谱中的干扰峰(拉曼光等)
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