ICR 小鼠

异硫氰酸荧光素（FITC）标记的兔抗小鼠Ig 抗体Hank's液

台式离心机离心管吸管移液管

1.  采用颈椎脱臼法处死小鼠，解剖取出脾脏放入盛有6 ml Hank's液的平皿中，用100 目钢网研磨，混匀。从中吸取1 ml细胞悬液放入一试管中，加满Hank's液，离心1000 rpm，10 分钟，洗涤细胞一遍。倾去上清，沉积的细胞恢复1 ml容积，即为约1x10⁷/ml的细胞悬液。另取一支试管，吸取1x10⁷/ml的细胞悬液0.4 ml加Hank's液3.6 ml，即为1x10⁶/ml的细胞悬液。
 

2.  取2 ml离心管两只，各加入1x10⁶ /ml的细胞悬液1 ml，用台式离心机离心2000 rpm，3 分钟，弃去上清液。一支加入荧光素标记的兔抗鼠Ig抗体100 ul，另一支不加抗体作对照，置4 ℃冰箱30 分钟。
 

3.  取出离心管，用Hank's 液洗涤细胞两次，以去除游离的抗体，最后一次离心后弃去上清液，留少许回流液，混匀，滴片，用荧光显微镜观察。

一、在滴片前要彻底去除游离的抗体，以避免假阳性结果。

实验结果
 

荧光显微镜观察，落射激发光下SmIg 阳性细胞可见环状或斑点状荧光。用钨丝灯光源透射光照明计数同一视野内淋巴细胞总数，共计数200～300 个淋巴细胞，算出其中SmIg 阳性细胞的百分数。