1. 每个鉴定反应按以下比例将各反应组分加入 1.5 ml 微量离心管中: 4 μl 5 × 酪蛋白激酶反应缓冲液 1 μl 10 mg/ml β-酪蛋白 1 μl [γ-32P] ATP 溶液(ATP 终浓度为 5 μmol/L, 放射活性为 5 μCi/μl) 1~14 μl 水 盖好离心管,混匀,放入 30℃ 水浴温育 10 min。
2. 加入 1~14 μl 有酪蛋白激酶活性的酶样品开始反应。
3. 30℃ 水浴,10 min。
4. 按不同的分析方法加入适当的试剂停止反应:加入 20 μl 10 % 的预冷 TCA 进行 TCA 沉淀,或 10~20 ml 预冷的 2 × SDS-PAGE 样品缓冲液进行电泳分析。用那些方法中的一种继续进行分析。 展开 |