细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法

　　 一、常用培养基

　　1、LB培养基

　　将下列组分溶解在0.9L水中：

　　蛋白胨10g

　　酵母提取物5g

　　氯化钠10g

　　如果需要用1NNaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

　　2、SOB培养基

　　将下列组分溶解在0.9L水中：

　　蛋白胨20g

　　酵母提取物5g

　　氯化钠0.5g

　　1mol/L氯化-钾2.5ml

　　用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。

　　3、SOC培养基

　　成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。

　　4、TB培养基

　　将下列组分溶解在0.9L水中：

　　蛋白胨12g

　　酵母提取物24g

　　甘油4ml

　　各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。

　　5、2×YT培养基

　　将下列组分溶解在0.9L水中：

　　蛋白胨16g

　　酵母提取物10g

　　氯化钠4ml

　　如果需要用1NNaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

　　6、YPD培养基

　　将下列组分溶解在0.9L水中：

　　蛋白胨20g

　　酵母提取物10g

　　葡萄糖20g

　　用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。

　　二、常用抗生素

　　氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）

　　溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

　　羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）

　　溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

　　甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）

　　溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。

　　卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）

　　溶解0.1g卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

　　氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）

　　溶解0.25g氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

　　链霉素（streptomycin）（50mg/ml）

　　溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

　　萘啶酮酸（nalidixicacid）（5mg/ml）

　　溶解0.05g萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

　　四环素（tetracyyline）（10mg/ml）

　　溶解0.1g四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

　　小技巧：如配制10mg/ml卡那霉素，先在盐水瓶或血清瓶加入10ml双蒸水，高压，冷却后加入0.1g卡那霉素，混匀，滤膜过滤到试管中，再以1ml/管分装到EP管中待用。