细胞技术专题：兔膀胱平滑肌细胞培养实验（三）
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本实验研究两只兔所有标本均获成功。倒置显微镜观察平滑肌细胞24 小时均可见膀胱平滑肌细胞贴壁生长，正常兔7 天左右、而梗阻兔则需10~12 天可于50ml 培养瓶约 80%汇合。
均传代顺利，传代后约正常兔6 天左右、而梗阻兔需8~9 天可于50 ml 培养瓶约80%汇合。
本组中均传至第8 代，经第8 次传代后，平滑肌细胞仍生长迅速，未见衰老迹象。
细胞爬片HE染色见膀胱平滑肌细胞细胞核呈两端钝圆的卵圆形平滑肌细胞核型。
电镜检查可见平滑肌细胞密班结构。免疫组化染色检测α-SMA呈阳性反应。
从细胞爬片HE染色和免疫组化染色检测α-SMA呈阳性反应中我们发现该方法所的膀胱平滑肌细胞的纯度几乎 99%(在以下的膀胱平滑肌细胞的共聚焦检测中也证实了这一点)。
膀胱平滑肌的鉴定[3]主要根据其细胞形态及α-actin的检测。
倒置显微镜下观察均呈“谷 和峰”样结构；细胞爬片HE染色见膀胱平滑肌细胞细胞核呈两端钝圆的卵圆形平滑肌细胞核型；电镜检查可见平滑肌细胞密班结构，这些细胞形态学的检测均证实其为膀胱平滑肌细胞。
免疫组化染色检测α-SMA呈阳性反应更进一步证实了该方法所获得的细胞为膀胱平滑肌细胞。
梗阻后的膀胱平滑肌细胞在生长扩增中明显较正常膀胱平滑肌细胞 时间长，说明了这种酶消化法对膀胱平滑肌细胞的影响不是太大，还是保留着体内的基本特性。
在我们的激光扫描共聚焦显微镜的检测中平滑肌细胞内的钙离子荧光强度在M受体激动剂的影响下发生明显变化，这更进一步证实了该方法分离培养出的膀胱平滑肌仍保持着收缩功能。
1. Korkmaz M, Guvenc BH, Bilir A et al. Isolation and culture of adult and fetal rabbit bladder smooth muscle cells and their interaction with biopolymers. J Pediatr Surg, 2003,38(1):21-24.
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